使用远红外荧光测量细胞内活性氧

活性氧（reactive oxygen species, ROS）是含有有氧细胞代谢产生的氧的化学活性分子。这些化学物质参与各种细胞过程，例如信号传导、稳态和免疫防御。然而，在环境压力下，细胞内的 ROS 水平会急剧增加，并导致脂质、蛋白质和核酸的氧化损伤^[1]。这些改变会导致各种病理事件，例如男性不育、癌变和许多其他生理状况^[2]。

荧光探针通常用于测量细胞内的 ROS 水平，其中绿色荧光探针最受欢迎。然而，绿色荧光范围内的检测和成像可能会受到细胞自发荧光的影响^[3]。使用远红外和近红外（NIR）荧光染料来测量 ROS 水平则避免细胞自发荧光的干扰。

SpectraMax iD 系列多功能微孔板读板仪采用专利的超冷却 PMT 和 4 光栅光路设计，可减少信号背景和杂散光。这些特性为远红外荧光检测提供了宽动态范围和灵敏度。

在此，我们演示了如何使用 SpectraMax iD5 微孔板读板仪通过两个荧光测定试剂盒测量细胞内 ROS 水平。使用光谱优化向导（Spectral Optimization Wizard）功能，我们优化了远红外分析的激发波长和发射波长组合。最后，我们比较了绿色荧光测定和远红外荧光测定之间的测定性能。

SpectraMax iD5 多功能微孔板读板仪与 SoftMax Pro 软件相结合，是荧光测量细胞内 ROS 水平的出色工具。SoftMax Pro 软件中的光谱优化向导和读取高度优化功能可自动优化分析条件以获得最佳结果。尽管 SpectraMax iD5 读板仪能够有效地检测这两种检测，但具有优化激发和发射波长的远红检测显示出比基于绿色荧光的检测略好的 Z' 因子。

目前 Molecular Devices 公司配备光谱优化向导（Spectral Optimization Wizard）功能的读板仪主要包括：SpectraMax iD3，SpectraMax iD5，这两款读板仪将分别被新上市的 SpectraMax iD3s 和 SpectraMax iD5e 取代，另外，SpectraMax i3x 以及 SpectraMax Paradigm 的 Tunable Wavelength（TUNE）检测卡盒也可使用 Spectral Optimization Wizard 功能。