破局糖蛋白纯化 — AutoTFF075切向流过滤系统高效清除小分子实战案例分享

糖蛋白是由蛋白质和糖链经共价结合形成的复杂分子。它们结构多样，合成过程复杂（涉及内质网和高尔基体），功能极其广泛，在细胞识别、信号传导、结构支撑、免疫保护、激素调节等方面扮演着不可或缺的角色。糖链的“糖密码”是生物信息的重要载体。

在糖蛋白的制备过程中常伴随种类繁多的小分子杂质，主要来源于生产过程中使用的宿主细胞、培养基、纯化工艺添加剂以及产品自身的降解。这些杂质在生产的各个环节（细胞培养、收获、纯化、制剂、储存）都有可能产生或残留。

糖蛋白（如单抗、融合蛋白、酶等）在生物制药和研究中具有重要的价值，但其纯化、浓缩、及换液过程极易“踩雷”：

如何破局？

英赛斯解决方案：

AutoTFF075 + 中空纤维柱

温和高效的破局之道！

面对客户糖蛋白样品中小分子杂质去除和活性保持的双重需求，我们推荐并成功应用了基于切向流过滤 (TFF) 的核心技术方案，采用英赛斯 AutoTFF075切向流过滤系统和低吸附、高兼容性的中空纤维柱。

方案优势

1

 温和低剪切

中空纤维柱独特的流道设计可显著降低流体剪切力，最大限度维持糖蛋白的天然结构和生物活性。

2

 超低吸附表面

采用精选膜材与优化组件设计，有效减少糖蛋白在膜面的非特异性吸附，提高回收率。

3

一步到位

浓缩 + 缓冲液置换 (透析过滤) 可在同一系统中连续完成，高效便捷。

4

精准可控

AutoTFF075切向流过滤系统提供精确的跨膜压 (TMP) 和切向流速 (CFV) 控制，确保工艺参数可精准优化。

5

高效去除小分子

通过透析过滤 (DF) 阶段，彻底清除小分子杂质。

实战工艺步骤（核心流程）：

图1：糖蛋白浓缩与缓冲液置换工艺流程图

系统准备：使用AutoTFF075切向流过滤系统，连接中空纤维柱（3KD，100cm2），进行预处理和缓冲液平衡。

温和浓缩：严格控制TMP和CFV在较低水平，优先确保蛋白活性，浓缩至目标体积。

图2：AutoTFF075 切向流过滤系统上温和的浓缩过程

高效透析过滤 (换液)：AutoTFF075可以进行等体积洗滤，持续稳定的加入目标缓冲液，同步滤出小分子杂质，并可精确控制洗滤倍数。关键点：确保换液倍数达标 (本案例 >10倍体积)。AutoTFF075通过自动化的方法进行超滤浓缩，大大减少了人工操作步骤和时间，提高了实验效率，并降低了操作误差，使结果更可靠、可重复。整个过程温和、高效、自动化程度高，能有效保持目标分子的生物活性。

图3：高效的透析过滤(换液)过程，小分子持续被洗脱

终点判定：通过滤出液电导率稳定及目标小分子的 HPLC 检测，确认杂质有效清除。AutoTFF075可实现洗滤体积或电导作为终点。

效果验证：HPLC 数据说话！

超滤前： 明显可见小分子杂质峰。

图4：AutoTFF075切向流过滤系统纯化前HPLC-SEC检测结果

超滤后：小分子杂质峰显著降低，糖蛋白主峰清晰，回收率高。

图5：纯化后所得目标物的HPLC-SEC检测结果

图6：滤液中的小分子杂质HPLC-SEC检测图谱

产品系列

AutoTFF系列切向流过滤系统：灵活、稳定、易用，全面覆盖从研发到生产的不同规模需求。

Hicient L-2000Bio高效液相色谱仪：系统经过专门设计，能够满足严格的方法重现性、线性和准确度标准。

选择英赛斯，选择专业可靠的纯化工具！

专注于制药与生物技术领域的仪器研发与制造。

提供从方法开发到工艺放大的全方位技术支持。

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