摘要
本次测定样品由国内知名药企提供,目标是希望能够开发出针对异亮氨酸(Ile)和亮氨酸(Leu)纯品试样的杂质组分及含量快速分析。本品为生产的氨基酸原料中的纯品试样,使用百康全自动氨基酸分析仪Biochrom30+进行程序优化。结果表明该程序的快速优化可以确保Ile+Leu的分离度≥1.7!其余氨基酸分离度≥1.2!为此类用户的内部快速测定,提供了更节省各项成本的实用程序的可能。详情见附件标准谱图。
一、样品前处理
1、所用试剂
1.1 水:去离子水
1.2 Loading Buffer:钠盐系统,pH 2.2
1.3 18种氨基酸标准品
2、前处理设备
1)分析天平:精度为 0.0001g
2)移液枪及枪头
3)一次性注射器及0.22μm滤膜
4)低范围pH试纸
3、样品制备
称取适量样品,加水(1.1)或Loading Buffer(1.2)溶解定容至容量瓶。测定并调至其pH值于2.2后,用一次性注射器取适量体积的试液,并过0.22μm的滤膜。移液枪移取1mL试液转移至进样瓶,上机待测。
针对其同一样品的试样溶液与杂质的浓度差别,可进行多倍数稀释液或大体积进样量、原液等情况,进行多次测试,得出准确的杂质占比含量。
二、分析方法描述(Biochrom 30+)
氨基酸分析仪分析方法参数:
1)色谱柱:Biochrom Na型阳离子交换树脂柱,4.6x20cm
2)分离程序:
运行时间:经分析时间+再生时间 58.4 min
3)反应单元温度:135°C
4)检测波长:570nm、440nm同时检测
附、氨基酸标准品及样品中的各个峰分离度:
图1. 标准品
图2. 样品
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