毛细管电泳技术在引物质控方向的应用

前言

       毛细管电泳技术可应用于离子、化合物、蛋白、核酸、糖类以及细胞 和病毒等物质的分离和分析，具有GX、快速、成本低、应用模式开放等显著优势。先多用于环境、食品和工业中的离子分析；药物成分分析和核酸蛋白分子产物检测等等。基于毛细管电泳技术研发的仪器很多，在核酸和蛋白检测方面，毛细管电泳技术也正在逐渐替代传统平板凝胶电泳技术。

毛细管技术特点

       毛细管电泳与传统的平板凝胶电泳相比具有高分辨率、高速度、高自动化的优势。Qsep系列毛细管电泳仪独特，就是基于毛细管电泳技术，巧妙的将电泳胶和染料预先混合，制作成成品检测耗材，结合激光诱导荧光检测器，可快速方便的进行核酸蛋白样本检测。可检测的样本非常广泛，例如：Oligo引物的质量控制、PCR产物检测、总RNA和DNA完整性质控、蛋白质-DNA相互作用测定以及核酸适配体的筛选。

引物方面的应用

       就引物质控来说，引物合成公司化学合成引物后通过HPLC仪器回收目的片段后进行冻干，后续还需要进行引物纯度检测。

       因为引物的主带和杂带分子量时间可能仅相差1-2和碱基，所以实验室一般采用PAGE方法进行纯度质控，整个质检过程比较繁琐复杂，先配置加有7M尿素的16%的聚丙烯酰胺凝胶，取0.2-0.5OD的引物用尿素饱和液溶解后变性95℃ 2min进行600V电压电泳，2-3h后，在紫外灯下检测带型，主带附近无杂带说明纯度高，条带不单一就要根据实际杂带亮度来判断是否需要重新合成。PAGE电泳的整个过程耗时较长，且无法对主带和杂带进行定量分析，更多靠经验判断样本合格与否。

       有条件的单位可以采用毛细管电泳-质谱联用（CE-MS）技术来质检Oligo引物，不过质谱仪价位较高，用于引物质控会提高引物合成的成本，现有单位利用Qsep系列毛细管电泳仪进行Oligo纯度质控，分辨率灵敏度会显著高于PAGE电泳，仪器价位合适，又可同质谱仪一样给出杂带占比，量化的质控数据更具准确性和直观性（见图1，图2所示）：