荧光显微镜标本要如何制作

 荧光显微镜是以紫外线为光源， 用以照射被检物体， 使之发出荧光， 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。

荧光显微镜标本要如何制作？

荧光显微镜标本制作方法一共分为5个步骤：
(一) 玻片及盖玻片(Slide and Coverslips)
(二)组织切片 (Tissue Sections)
(三)细胞培养法 (Cell Culture Preparation)
(四) 涂抹法或捺压法(Smear and Impression Preparation)
(五) 固定 (Fixation)

荧光显微镜标本制作步骤

(一) 玻片及盖玻片(Slide and Coverslips)
玻片及盖玻片品质必须很好而没有荧光，玻片厚度≦1.0mm 者便可用，玻片需要清洗，必须以中性清洁剂洗净，再浸于含有3％HCl 之乙醇12～ 24 小时，然后再储存于纯酒精。要用时，以清洁纱布擦净或火焰烘干。用完后可浸于水中，移去封埋物，再经清洁剂及重酪酸－硫酸混合物＊处理。
＊重酪酸一硫酸混合物之配法：
1.粗制重酪酸钾300 gm
2.20％ 硫酸水溶液3000 ml
3.使用珐琅质或陶质容器，先放入20％ 硫酸水溶液，然后缓缓加入粗制重酪酸钾，以玻璃棒搅拌，此时会发热，待冷却后使用。目前已有处理好的玻片出售，使用上非常方便。

(二) 组织切片 (Tissue Sections)
组织切片愈薄愈好(4μ)，如果切片太厚，则可能自体及非特异荧光增加，目前都用冷冻切片机(Cryostat) 来切，冷冻切片机包括冰冻柜(Refrigerated Cabinet)，温度在0℃～-30℃ 之间，切片机(Microtome) 放在里面，将组织在-20℃ 冰冻10 分钟，就可以切，切下之薄片，以玻片捺下后在室温急速干燥。制备好之切片必须尽可能马上固定及染色。如果切片必须储放短时间( 约1 周)，则固定后密封储放于-70℃，要染色时，切片必需回温到室温方启开。

(三) 细胞培养法 (Cell Culture Preparation)
细胞培养法一般用盖玻片在组织培养盘( 例如24 孔)或培养在玻璃片(Chamber Slide) 上，再和普通接种病毒一样，接种可疑病材乳剂，培养数天，取出，干燥、固定、水洗，再用标示抗体染色以检查特异荧光。

(四) 涂抹法或捺压法(Smear and Impression Preparation)
所用玻片需很薄，一般用盖玻片代用，将所要检查之病材，如血液、组织液或其他病材，在玻片上涂抹或捺压，涂抹或捺压片在室温用吹风机或电风扇( 以冷风吹干)，以甲醇或丙酮固定，放于密封标本箱于-20℃ 备染或马上染色。

(五) 固定 (Fixation)
除了使组织固定于玻片外，另一方面亦可助抗原－抗体复合物之形成，例如把脂质溶解，使抗体抗原较易反应。一般用100％ Methanol 在室温作用2 分钟，或丙酮于-20℃ 下10 分钟来固定微生物抗原及病毒。

注意事项
一般染色标本，应立即观察，因当时荧光Z显著；若不能马上观察，须储存于干燥盒(Polyethylene Bag) 内，有时在0～5℃ 储存，可保存一个月左右，仍可呈现特异荧光。

（来源：广州市明美光电技术有限公司）