上海富衡 | 细胞到货后需要在多长时间内进行处理
运输条件与最佳处理时间
1、常温运输(20-25℃)
处理时间:≤24 小时
原因:常温下细胞代谢活跃,培养基中的营养物质(如葡萄糖、氨基酸)会快速消耗,同时乳酸、氨等代谢废物积累,导致培养基 pH 下降(正常 pH 7.2-7.4,低于 6.8 时细胞活性显著降低)。若超过 24 小时未处理,细胞可能因酸性环境或营养匮乏而死亡。
2、冰袋低温运输(4-8℃)
处理时间:≤72 小时
原因:低温可抑制细胞代谢(代谢速率降低 50%-70%),延缓营养消耗和废物产生,但培养基中的谷氨酰胺仍会缓慢分解产生氨,且长时间低温可能导致细胞骨架损伤或凋亡。一般建议在 3 天内完成处理,若运输时间超过 72 小时,需提前联系供应商确认细胞状态。
3、恒温 CO?运输(37℃+5% CO?)
处理时间:≤5 天
原因:恒温 CO?环境可维持培养基 pH 稳定,细胞能在接近培养箱的条件下存活较长时间,但完全培养基中的血清成分可能因长时间 37℃储存而变质,且细胞持续增殖可能导致融合度过高(如从 70% 升至 90% 以上),增加消化难度或引发接触抑制。
细胞状态与紧急处理情形
1、需立即处理的情况
培养基颜色异常:若培养基变为深黄色(酸性过强)或紫色(碱性过强),提示 pH 已超出细胞耐受范围,需立刻更换新鲜培养基,避免细胞因酸碱失衡死亡。
培养基浑浊或出现絮状物:可能是细菌或真菌污染,需立即在生物安全柜中观察细胞状态,若细胞贴壁良好且污染不严重,可尝试用 PBS 洗细胞后更换培养基并添加抗生素(如青霉素 + 链霉素);若污染严重,建议丢弃细胞并彻底消毒操作环境。
细胞大量脱落或变圆:可能因运输震荡、温度波动或代谢紊乱导致细胞损伤,需尽快处理并观察后续贴壁情况,必要时进行细胞拯救(如降低消化时间、使用细胞拯救培养基)。
2、可暂缓处理的情况
运输时间短(如 < 12 小时)且细胞状态良好:培养基颜色正常、细胞贴壁均匀,可暂时将细胞放入培养箱(37℃+5% CO?)静置 1-2 小时,让细胞适应温度后再进行换液或传代,避免因温差刺激导致细胞应激。
不同细胞类型的处理时间差异
细胞类型 | 代谢特性 | 建议处理时间 | 注意事项 |
永生化细胞系 | |||
原代细胞 | |||
干细胞 |
标准处理流程与时间管理建议
到货后立即执行的步骤
30 分钟内:开箱检查包装是否完好,记录运输温度(如冰袋是否融化、恒温箱温度是否达标),拍照留存细胞状态(培养基颜色、细胞贴壁情况),消毒放入后培养箱稳定2-3小时。
2-3小时后:显微镜下观察细胞形态后,在生物安全柜中打开 T25 瓶:
若细胞贴壁良好、培养基清亮,可吸去部分旧培养基(保留2-3mL),补充新鲜完全培养基后放入培养箱,24 小时内完成首次换液。
若细胞密度较高(如融合度 > 80%),需立即进行传代,避免细胞老化。
延迟处理的临时保存方法
若因实验安排需延迟处理(如隔夜),可将细胞放入4℃冰箱临时保存(最多12小时),并在保存前更换 1/2 体积的新鲜培养基,减少代谢废物积累;但需注意:4℃保存仅为应急措施,不可长期使用,以免细胞活性下降。
总结
最佳处理时间:常温运输细胞应在24 小时内处理,低温运输可放宽至72 小时内,但需根据细胞状态灵活调整,出现异常(如培养基变色、污染)时需立即处理。
核心原则:细胞到货后处理越及时,活性保留越完整,后续实验(如增殖、分化、转染)的成功率越高。建议实验人员提前规划时间,确保到货后能快速响应,避免因延误导致细胞损失。
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