细胞培养过程中如何能有效避免支原体污染？| 上海富衡

支原体污染不仅会干扰细胞的正常生长、代谢与功能，还可能导致实验结果的偏差与不可靠，甚至使长期的研究努力付诸东流。因此，有效避免支原体污染对于保障细胞培养工作的顺利进行和实验数据的准确性至关重要。以下将详细探讨在细胞培养过程中预防支原体污染的综合策略。

实验室环境管理

1. 空间布局与清洁消毒：合理规划细胞培养实验室的空间布局，将细胞培养区、试剂准备区、灭菌区等严格分开，减少不同操作区域之间的交叉污染风险。定期对实验室进行全面清洁，使用合适的消毒剂如 75% 乙醇、过氧乙酸等擦拭地面、台面和仪器设备表面。对于细胞培养箱、超净工作台等关键设备，每周至少进行一次深度清洁和消毒。细胞培养箱内可放置硫酸铜溶液或专用的消毒盒，抑制微生物生长。超净工作台在每次使用前后，需开启紫外灯照射 30 分钟以上，以杀灭可能存在的微生物，包括支原体。

2. 空气净化与过滤：安装空气净化系统，如高效空气过滤器（HEPA），能够有效过滤空气中的微生物颗粒，包括支原体，其直径通常在 0.1 - 0.8μm 之间，HEPA 过滤器可滤除 99.97% 以上的 0.3μm 颗粒。保持实验室空气正压，防止外界污染空气进入。同时，定期更换空气过滤器，确保其过滤效果。对于进入实验室的新风，应进行严格的过滤和消毒处理，减少空气中支原体等污染物的来源。

实验器材与试剂管理

1. 器材灭菌处理：所有用于细胞培养的器材，包括培养瓶、培养皿、移液管、离心管等，必须经过严格的灭菌处理。玻璃器材可采用干热灭菌法，在 160 - 180℃下烘烤 2 - 4 小时；塑料制品则多采用高压蒸汽灭菌，121℃、15 - 20 分钟，确保器材无菌。对于一些不耐高温高压的器材，如滤器、枪头盒等，可采用环氧乙烷灭菌或 γ 射线辐照灭菌。灭菌后的器材应妥善保存，放置在清洁、干燥的环境中，避免二次污染。

2. 试剂质量把控与处理：细胞培养所用的试剂，如培养基、血清、胰酶等，应选择质量可靠、信誉良好的供应商。在购买试剂时，要求供应商提供支原体检测报告，确保试剂无支原体污染。对于新开封的试剂，建议进行支原体检测后再使用。血清是细胞培养中易受污染的试剂之一，可采用热灭活处理（56℃，30 分钟）来灭活补体和可能存在的支原体，但需注意热灭活可能会影响血清中某些生长因子的活性。培养基在配制过程中，应使用无菌水，并严格按照操作规程进行。配制好的培养基可通过 0.22μm 或 0.1μm 的滤膜过滤除菌，该孔径可有效截留支原体。同时，避免培养基长时间暴露在空气中，尽量现用现配。

细胞来源与操作规范

1. 细胞来源筛查：获取细胞时，务必选择可靠的细胞库或供应商，并要求提供详细的细胞鉴定和支原体检测报告。对于新引入的细胞系，应在隔离环境中进行至少两周的培养观察，并多次进行支原体检测，确保细胞无支原体污染后，方可正式用于实验。对于来源不明的细胞，坚决不予使用，以从源头上杜绝支原体污染的可能性。

2. 规范实验操作：操作人员进入细胞培养实验室前，应更换工作服、鞋套，佩戴口罩和手套，并进行手部消毒。在超净工作台内操作时，保持良好的操作习惯，避免不必要的动作和交谈，减少空气流动带来的污染风险。操作过程中，所有器材和试剂应避免接触超净工作台边缘或其他可能受污染的区域。不同细胞系的操作应分开进行，避免交叉污染。在进行细胞传代、换液等操作时，严格遵守无菌操作规程，如使用无菌的移液管、枪头，避免反复吹打细胞，防止细胞受损并增加污染机会。

定期检测与污染处理

1. 定期支原体检测：建立定期的支原体检测制度，对培养的细胞进行常规监测。常用的检测方法包括 PCR 检测、支原体培养法、荧光染色法等。PCR 检测具有灵敏度高、检测速度快的优点，能够快速准确地检测出细胞中微量的支原体 DNA。建议每周对细胞进行一次 PCR 检测，对于长期培养的细胞系，每月进行一次全面的支原体检测，包括培养法和荧光染色法，以确保检测结果的可靠性。

支原体检测试剂盒

1. 污染处理措施：一旦发现细胞受到支原体污染，应立即采取措施进行处理。对于价值不高的细胞，应果断丢弃，并对相关的器材、试剂和培养环境进行彻底消毒，防止污染扩散。对于珍贵的细胞系，可尝试使用支原体清除剂进行处理。可以使用我我们富衡的自研的支原体清除剂，清除效果非常强，价格也很亲民。按照产品说明书的要求进行处理，通常需要连续处理 3 - 5 代细胞，并在处理过程中定期检测支原体，直至检测结果为阴性。处理后的细胞应在隔离环境中进行培养观察，确保支原体彻底清除后，方可重新用于实验。

支原体清除剂

细胞培养中有效避免支原体污染需要从实验室环境管理、实验器材与试剂管理、细胞来源与操作规范以及定期检测与污染处理等多个方面入手，建立全面、系统的防控体系。通过严格执行各项防控措施，加强操作人员的培训与意识，能够最大程度地降低支原体污染的风险，保障细胞培养工作的顺利进行和实验结果的准确性。