小鼠单个核细胞分离液说明书

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全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。首先根据样本量大小，分以下几种情况：一、使用15ml离心管时：情况A：血液样本量小于3ml时，实验方法如下：1.取一支15ml离心管，加入3ml分离液。2.用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，400-650g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到Z理想分离效果）。3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。**层为血浆层。第二层为环状乳白色单个核细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色单个核细胞层到另一15ml离心管中，向所得离心管中加入10ml清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。5.250g，离心10min。6.弃上清。7.用吸管以5ml清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。8.250g，离心10min。9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。情况B：血液样本量为3-6ml时，实验方法如下：1.取一支15ml离心管，先加入与血液样本等量的分离液。2.用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，400-650g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到Z理想分离效果，但Zda离心力**不超过1000g）。3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。**层为血浆层。第二层为环状乳白色单个核细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色单个核细胞层到另一15ml离心管中，向所得离心管中加入10ml清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。5.250g，离心10min。6.弃上清。7.用吸管以5ml清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。8.250g，离心10min。9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。二、使用50ml离心管时：小鼠单个核细胞分离液说明书情况A：血液样本量为6-10ml时，实验方法如下：1.取一支50ml离心管，先加入与血液样本等量的分离液。2.用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，500-950g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到Z理想分离效果，但Zda离心力**不超过1200g）。3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。**层为血浆层。第二层为环状乳白色单个核细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色单个核细胞层到另一15ml离心管中，向所得离心管中加入10ml清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。5.250g，离心10min。6.弃上清。7.用吸管以5ml清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。8.250g，离心10min。9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。情况B：血液样本量为10-20ml时，实验方法如下：1.取一支50ml离心管，先加入与血液样本等量的分离液。2.用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，650-110g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到Z理想分离效果，但Zda离心力**不超过1200g）。3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。**层为血浆层。第二层为环状乳白色单个核细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色单个核细胞层到另一15ml离心管中，向所得离心管中加入10ml清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。5.250g，离心10min。6.弃上清。7.用吸管以5ml清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。8.250g，离心10min。9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。小鼠单个核细胞分离液说明书【注意事项】1.全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。为获得Z理想的实验结果，**在取血2h内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过6h后分离效果更差甚至不能达到分离目的。2.本实验**不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。3.吸取过多的单个核细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。4.吸取过多的单个核细胞层上层溶液会导致血浆蛋白及血小板混杂。5.如所实验后细胞得率或活性过低，请联系上海研谨技术支持以寻求帮助，具体联系方式详见下方生产企业信息。6.当血液样本粘度过高需稀释时，Zyou稀释方法：将血液与样本稀释液（产品编号：2010C1119）1:1稀释混匀备用。注：不当的稀释方法会降低细胞得率及活性。如血液样本经过稀释则分离过程中需适当降低离心力和离心时间。小鼠单个核细胞分离液说明书【储存条件及有效期】18-25℃保存，有效期2年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。【参考值（参考范围）】本实验淋巴细胞提取率及纯度均大于80%。下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。
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