猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒说明书

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猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒说明书1符合率试验PCV2ELISA与间接免疫荧光检测方法（IIF）的比较由上表结果显示ELISA方法阳性检出率为63.3%,阴性检出率为36.7%；而用猪2型圆环病毒间接免疫荧光试验阳性检出率为59.2%,阴性检出率为40.8%。其中两种方法检测阳性符合率为90.3%,阴性符合率为94.4%，总符合率为91.8%。表明ELISA在测定抗体效价时较为敏感。注：间接免疫荧光检测方法（IIF）是实验室检测圆环病毒经典方法。PCV2ELISA与荷兰塞迪的捕获ELISA试剂盒（商品化）的比较用PCV2ELISA试剂盒检测117份猪血清，结果阳性率为72.65%，阴性率为28.35%。对比国外试剂盒检测结果，阳性率为70.94%，阴性率为29.06%。阳性符合率为64.96%，阴性复核率为21.37%，总符合率为86.32%。注；荷兰塞迪的捕获ELISA试剂盒（商品化）在国内使用的比较少，其效果还有待验证。猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒说明书使用说明书【简介】试剂盒由抗原包被的微孔板，酶标羊抗猪IgG及其它试剂制成，应用间接ELISA原理检测猪血清中抗Ⅱ型圆环病毒ORF2蛋白的抗体。【用途】猪圆环病毒2型ELISA抗体检测诊断试剂盒用于检测猪血清中抗Ⅱ型圆环病毒ORF2蛋白的抗体。评估猪场圆环病疫苗免疫状况。感染猪的血清学诊断。【原理】本试剂盒是采用猪圆环病毒2型ORF2基因的工程表达产物包被微孔板，在试验中，加入稀释的对照血清和待检血清，经温育后，若样品中含有抗猪圆环病毒2型ORF2蛋白特异性抗体，则将与检测板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，加入HF溶液终止反应后，用酶标仪630nm波长测定各反应孔中的OD值。【试剂盒主要成分】1包被抗原的微孔板2块（96孔/块）2阴、阳性对照血清各1管（1ml/管）3羊抗猪酶标二抗1瓶（30ml/瓶）420倍浓缩洗涤液1瓶（50ml/瓶）5底物A液、B液各1瓶（10ml/瓶）6终止液1瓶（10ml/瓶）7样品稀释液1瓶（50ml/瓶）8血清稀释板2块（96孔/板）9说明书1张【样品制备】取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。【洗涤液配制】使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解（**在37℃水中加热5-10min），然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释（例如：每板用20ml浓缩液加上380ml水），稀释好的洗涤液在4℃可以存放7天。【样品稀释】在血清稀释板中按1：40的体积稀释待检血清（195μl样品稀释液中加5μl待检血清）。注意：阳性和阴性对照1：4稀释，（180μl样品稀释液中加60μl对照血清，吹打均匀）。【注意事项】1试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用后放回2-8℃。2不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。3不要用口移液。4TMB（底物液B）不要暴露于强光，避免接触氧化剂。5检测板拆封后避免受潮或沾水（未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，应尽快置于2-8℃）。6待检血清样品数量较多时，应先使用血清稀释板稀释完所有要检测血清，再将稀释好的血清转移到检测板，使反应时间一致。7浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释，如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。8严格按照操作说明书可以获得**的结果，操作过程中移液，定时和洗涤等的全过程必须极ng确。猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒说明书【操作步骤】1取检测板（根据样品多少可拆开分次使用），用稀释好的洗涤液洗板2次（200l/孔）每次静置2分钟后倒掉，再在干净吸水纸上拍干。2取稀释好的待检样品100μl加入到检测板中；阴性对照和阳性对照各设2孔，每孔100μl；轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃温育30分钟。3甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗板3次，200μl/孔，每次静置3分钟倒掉，再在干净吸水纸上拍干。4每孔加羊抗猪酶标二抗100μl，置37℃温育30分钟。5洗涤5次,方法同3。切记每次在干净吸水纸上拍干。6每孔先加底物液A一滴（50l）、再加底物液B一滴（50l），混匀，室温（18℃-25℃）避光显色10分钟。7每孔加终止液1滴（50μl），10分钟内测定结果（检测前在震荡器上轻轻震动一下）。【结果判定】在酶标仪上测各孔OD630值。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630值大于或等于1.0，阴性对照孔平均OD630值必须小于0.3。样品OD630值大于0.42，判为阳性；样品OD630值在0.38到0.42之间，判为可疑；样品OD630值小于0.38，判为阴性。注意：用620~650纳米波长测定结果均有效。【贮存】2-8℃避光保存【有效期】6个月
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