大鼠S100钙结合蛋白B(S100B)说明书AE90735Ra
- 上传人: 上海联硕生物科技有限公司 |大小:235.27KB|浏览:1151次|时间:2018-09-21
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大鼠S100钙结合蛋白(S100B)酶联免疫检测试剂盒使用说明书AE90735Ra使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理,来检测大鼠S100钙结合蛋白(S100B),只能用于研究用途,不得用于医学诊断。用途:用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中S100钙结合蛋白(S100B)测定。工作原理本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中大鼠S100钙结合蛋白(S100B)水平。向预先包被了大鼠S100钙结合蛋白(S100B)克隆抗体的酶标孔中加入大鼠S100钙结合蛋白(S100B),温育;温育后,加入生物素标记的抗S100B抗体。再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠S100钙结合蛋白(S100B)的浓度呈正相关。试剂盒组成试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品:6400pg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存链霉亲和素-HRP3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存生物素标记的抗S100B抗体0.5ml×1瓶1ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存需要而未提供的试剂和器材1.37℃恒温箱。2.标准规格酶标仪。3.精密移液器及一次性吸头4.蒸馏水,5.一次性试管6.吸水纸注意事项1.从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差3.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.4.为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。5.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。6.底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。洗板方法手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中标本要求1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。操作程序1.标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)3200pg/ml5号标准品120μl的原倍标准品加入120μl标准品稀释液1600pg/ml4号标准品120μl的5号标准品加入120μl标准品稀释液800pg/ml3号标准品120μl的4号标准品加入120μl标准品稀释液400pg/ml2号标准品120μl的3号标准品加入120μl标准品稀释液200pg/ml1号标准品120μl的2号标准品加入120μl标准品稀释液2.根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。3.加样:1)空白孔,空白对照孔不加样品,生物素标记的抗S100B抗体,链霉亲和素-HRP,只加显色剂A&B和终止液,其余各步操作相同;2)标准品孔:加入标准品50ul,链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体,故不加);3)代测样品孔:加入样本40ul,然后各加入抗S100B抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul,盖上封板膜,轻轻震荡混匀,37℃温育60分钟。4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6.显色:每孔先加入显色剂A50ul,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.7.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。8.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后10分钟以内进行。9.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。操作程序总结:检测范围:50pg/ml→3200pg/ml。保存:2-8℃。有效期:6个月(2-8℃)。
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