凯氏法测定非蛋白质氮的测定知识

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用凯氏法测定蛋白质的含氮量相当恒定（约14%一18%），平均含量约为16%。因此，蛋白质氮乘以6.25%即为蛋白质含量。　　如果实验需要时，也可以用以下方法直接测定。　　测定的流程是，称取0.2-0.5g风干的植物材料，放入100ml烧杯中，加入50ml水，煮沸5min，在40-50℃下保温30min。徐徐加入10ml6%硫酸铜，摇匀，静置lh（或过夜）。过滤，残渣按凯氏定氮法将残渣消化，蒸馏，测定收集液中氨，计算得出含氮量。非蛋白质氮包括溶于水的氮化物，如氨基酸、酸性氮和有机含氮碱等。　　其总量可以按总氮减去蛋白质氮计算得出，也可以按下法测定，即：称取0.2-0.5g植物样品，放入研钵中加2ml水，研磨成匀浆态。加入3ml3%硫酸铜溶液，摇匀，匀浆转移到离心管内，同时以8ml水冲洗净残渣。　　离心管放入沸水中，用玻璃棒搅拌3min。取出加入3ml0.2mol/L的NaOH，搅匀，静放10min，离心。将溶液放入100ml凯氏瓶中，用热水冲洗沉淀2次，每次用10ml，每次冲洗时要向冲洗的水中加人l滴3%的硫酸铜溶液。　　然后向凯氏瓶的浸出物中加入2ml浓硫酸，O.3m110%钼酸钠（10gNa2MoO42H2O溶解于100m1水中，加入0.5ml2mol/LNaOH，加热至沸，并煮沸15min，冷却后补充无氨水100ml），4滴3%过氧化氢。放在电炉上蒸发，直至出现泡沫，然后降低温度以免泡沫溅到瓶颈上。继续用微火加热直至硫酸出现白色蒸汽。　　之后用球形玻璃塞塞上凯氏瓶口，增强火力，消化到溶液透明为止。冷却后向瓶中残留物加入10ml水。溶液转人50ml容量瓶中，用水冲洗残渣，并补加水到50ml，混匀。取25ml溶液放人烧杯中滴定。加1滴0.1%甲基橙溶液，冷却后，以2mol/LNaOH溶液滴定，直到指示剂呈现黄色为止，不能滴定过头。然后加10ml含有溴酸钾的pH6.7的磷酸缓冲液和5ml0.12mol/L氯氨溶液（15g氯氨溶于水中，用水稀释到1L，混匀，用棉花过滤后，装入暗色瓶中），即用玻璃盖盖住烧杯，以圆周运动方式将溶液混匀，并静置25min，其后加入2ml2%碘酸钾溶液，10m18%草酸溶液。　　在有淀粉指示剂存在下，用0.02mol/L硫代硫酸钠溶液滴定释放出来的的碘。1ml0.02mol二硫代硫酸钠相当于0.09338mg氮。另按此法设不加样品的对照，操作步骤完全与上相同。　　Z后按下面公式计算样品中的非蛋白氮含量。　　X（非蛋白氮含量%）=[0.4667×50×K×（6z-6）1/（25×7n）=[0.9338×K×（a-b）]/72　　式中：　　50为试液体积（ml）;　　25为用氯氨法测定时所取试液的体积（ml）;　　a为滴定对照所用去的0.02mol二硫代硫酸钠体积（ml）;　　b为滴定试液所用去的0.02mol/L硫代硫酸钠体积（ml）;　　K为硫代硫酸钠溶液的滴定度372为分析的样品重。
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