血浆中C5a的ELISA测定
- 上传人: 上海易利生物科技有限公司 |大小:14.84KB|浏览:276次|时间:2018-10-01
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实验原理将抗C5a单克隆抗体包被固相聚苯乙烯板,加入经聚乙二醇(PEG)处理的待测样本,然后依次加入兔抗人C5a-IgC多克隆抗体和过氧化物酶标记的猪抗兔IsC,再加入底物2,2’-连氮-双(3-乙基苯骈唑啉-6-磺酸盐)(ABTS)和H2O2显色,于酶标仪405mn处测定每分钟光密度增加量(OD/min),以OD/min为纵坐标,C5a标准晶浓度为横坐标绘制标准曲线图,求出待测样本中C5a的含量。实验试剂1.PBSPH7.2,9mmol/L磷酸盐缓冲液含140mmol/LNaCl。2.PBS-TweenpH7.2PBS含0.05%Tween20,简称PBS-T。3.底物溶液:100mL2mmol/LABTS溶液中含100mmol/L醋酸钠,50mmol/L磷酸钠,2.5mmol/LH2O2。4.沉淀剂:①:100mLpH8.0,20mmoL/LTris-甘氨酸-HCl缓冲液中含20gPEG4000,0.8gRivanol;沉淀剂②:100mLpH2.0.100mmol/L甘氨酸-HCl缓冲液中含20gPEG4000。
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