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绵羊主要组织相容性复合体ELISA试剂盒使用步骤

上传人: 上海易利生物科技有限公司 |大小:39.5KB|浏览:382次|时间:2018-10-01
绵羊主要组织相容性复合体ELISA试剂盒使用步骤
文档简介

绵羊主要组织相容性复合体ELISA试剂盒使用步骤使用目的:本试剂盒用于测定绵羊血清、血浆及相关液体样本中主要组织相容性复合体(MHC)含量。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(3200ng/L)0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。1600ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液800ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液400ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液200ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液100ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。2.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。3.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用4.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。5.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。6.温育:操作同3。7.洗涤:操作同5。8.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.9.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。10.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6个月
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