Na~+-K~+-ATP酶活性比色法定量检测试剂盒说明书

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Na~+-K~+-ATP酶活性比色法定量检测试剂盒说明书主要用途ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，机体在缺氧及等状态下，ATP酶受到损伤，活力下降。ATP酶活力的大小是各种细胞能量代谢及功能有无损伤的重要指标。本测试盒可测钠钾ATP酶、钙镁ATP酶的活性。样品为各种组织及红细胞等，本法的Zda特点是样品前处理不需要高速离心机，方法简便、快速。产品内容缓冲液（ReagentA）6毫升反应液（ReagentB）6毫升底物液（ReagentC）6毫升阴性液（ReagentD）6毫升标准品（reagentE）6微升产品说明书1份保存方式保存反应液（ReagentB）和底物液（ReagentC）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；底物液（ReagentC）避免光照，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于反应液配制的容器微型台式离心机：用于样品制备比色皿或酶标板：用于比色的容器分光光度仪：用于比色分析酶标仪：用于微量样品比色分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的反应液（ReagentB）和底物液（ReagentC）置入冰槽里融化。底物液（ReagentC）避免光照。然后进行下列操作。样品准备选择一：血浆样品1．准备好ACD抗凝管（注意：避免使用肝素或EDTA抗凝管）2．抽取2毫升血液，置于抗凝管里3．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g4．小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分（注意：避免触碰白色液体层）5．即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存6．（选择步骤）移取50微升进行蛋白定量测定选择二：血清样品1．准备好不含抗凝剂的储存管2．抽取2毫升血液，置于储存管里3．室温下，静置30分钟，直至血液凝结4．放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为5000g5．小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）6．即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存7．（选择步骤）移取50微升进行蛋白定量测定选择三：组织样本准确称取组织重量，按照重量（g）：体积（ml）=1:9的比例，加入9倍的是PBS或者生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，去上清液待测。二、测定准备1.准备好上述待测样品，置于冰槽里2.设定好分光光度仪（温度为37℃）：波长440nm三、样本测定1．在96孔酶标板上做好相应标记：背景对照，标准品孔和样品孔2．分别移取50微升缓冲液（ReagentA）到相应孔中3．设定标准品孔(加入50微升标准品），样本孔(加入50微升样本)阴性液孔(加入50微升阴性液（ReagentD）4．分别加入50微升反应液（ReagentB）5．轻轻摇动96孔酶标板6．在37℃温度下孵育2分钟7．放进酶标仪，置零8．取出酶标板，分别加入50微升底物液（ReagentC）9．轻轻摇动酶标板10．即刻放进酶标仪检测，包括（0分钟初始读数和5分钟读数）四，样本计算样本活性=样本OD值/标准OD值*标品浓度
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