细菌基因组DNA纯化试剂盒
- 上传人: 深圳市科润达生物工程有限公司 |大小:101.92KB|浏览:698次|时间:2018-11-14
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本公司新推出的全新细菌基因组纯化试剂盒,操作简便,纯化量大,可纯化革兰氏阳性和阴性菌的基因组DNA。细菌基因组DNA提取试剂盒使用说明本试剂盒可用于革兰氏阴性和阳性菌的基因组DNA提取,由细菌重悬液、裂解液、蛋白沉淀液以及DNA溶解液组成。可从1-5ml菌液中提取基因组DNA。整个提取过程不超过45分钟。提取过程包括:1菌液离心,重悬。2裂解菌体,释放基因组DNA。3盐析沉淀蛋白,分离DNA。4异丙醇沉淀脱盐并浓缩。570%乙醇清洗,晾干并用DNA溶解液溶解。本试剂盒采用复合裂解液,其中含有YZDNA酶的成分,在加热(65°C)状态下,可保证完整的细菌基因组DNA的充分裂解释放,本试剂盒即可提取异丙醇沉淀时,罕见浑浊的蛋白质杂质的共沉淀。提取的基因组可用于PCR扩增、内切酶消化以及膜杂交等。一、试剂盒组成(本试剂盒提供的组份,至少可提取100份1-5ml菌液基因组DNA的纯化,每种组份均有足够的富余量)1.复合裂解液:30ml1瓶。2.蛋白沉淀液:300ml1瓶。3.DNA溶解液:20ml1瓶。4.操作说明书一份。二、本试剂盒未提供,须用户自备的试剂为:异丙醇,70%乙醇(国产分析纯)。三、提取操作:1.菌液离心:取革兰氏阴性菌菌液1-2ml;或者革兰氏阳性菌菌液2-5ml,1000rpm离心1分钟。2.加入细菌重悬液100ul,震荡使菌体重悬。3.将复合裂解液置65°C水浴加热,使结晶成分溶解,每个细菌重悬液中分别加入300ul的复合裂解液。4.混璇器震荡混匀10秒,置65°C水浴中反应10分钟(革兰氏阴性菌),20分钟(革兰氏阳性菌)。5.各管中加入300ul蛋白沉淀液。上下颠倒5-6次使两者混匀。6.13000-16000×g,离心3-5分钟。7.将上清液转移至新的离心管中(注意:由于有些细菌含有多糖或者脂蛋白成分,离心后会出现细胞成分上浮的情况,此时取漂浮层下的均一透明液体),加入等体积异丙醇,此时可见透明的絮状物,混匀后离心,同步骤5,吸去上清。8.离心管中加入200ul,70%的乙醇溶液,来回倒置,清洗管壁,离心同上。9.移去70%乙醇,倒置离心管于干净的滤纸上,自然干燥10-15分钟,加入DNA溶解液100ul。10.快速漩涡震荡1-2秒,使DNA溶解液冲刷到所有沉淀的DNA。11.将纯化的全血基因组置65C水浴1小时,或4C过夜使DNA充分溶解(要求不严格的PCR试验可缩短时间或省去该步),轻轻弹动管壁有助于溶解基因组DNA可直接进行PCR等下一步操作。四、注意事项:1.用户可选择使用RNaseA,使用方法为:在第3步完成后1.5ulRNaseA,混匀后,37C孵育15分钟,冷却至室温。(RNaseA的配法:将RNaseA溶于TEbuffer中,浓度为4mg/ml,煮沸10分钟,以去除DNase,分装后-20C保存;也可购买配好的试剂使用。)2.革兰氏阳性菌由于细胞壁的存在,纯化的量较阴性菌要少一倍以上。3.提取得DNA样本在70%乙醇中,存于-80C,可长期保存。五、储存条件:本试剂盒在室温条件下可保存一年。
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