组织肉毒碱棕榈酰转移酶I活性比色法定量检测
- 上传人: 上海科学仪器有限公司 |大小:55.53KB|浏览:783次|时间:2018-11-18
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主要用途组织肉毒碱棕榈酰转移酶I(CARNITINEPALMITOYL-TRANSFERASEI)活性比色法
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主要用途组织肉毒碱棕榈酰转移酶I(CARNITINEPALMITOYL-TRANSFERASEI)活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过肉碱和脂酰辅酶A以及特定YZ剂反应系统中释放出巯基辅酶A,使用Ellman试剂,产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化,即采用比色法来测定组织裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解悬液样品(动物、人体等)肉毒碱棕榈酰转移酶I的特异活性检测。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。技术背景脂肪酸β氧化过程(β-oxidation)在动物组织的线粒体发生的脂肪酸代谢通路,可概括为活化、转移、β氧化及Z后经三羧酸循环被彻底氧化生成CO2和H2O,并释放能量等四个阶段。大于10个碳(C10)的活化型长链脂酰辅酶A是不能直接透过线粒体内膜,需要借助肉碱(camitine),即L-3羟-4-三甲基铵丁酸,而被转运入线粒体内,在线粒体内膜的外侧及内侧分别有肉碱脂酰转移酶(carnitinepalmitoyltransferase;CPT;EC2.3.1.21)I和Ⅱ。位于内膜外侧的酶Ⅰ,促进脂酰CoA转化为脂酰肉碱,后者可借助线粒体内膜上的转位酶(或载体),转运到内膜内侧,然后,在酶Ⅱ催化下脂酰肉碱释放肉碱到胞浆,留下脂酰CoA。由此位于胞浆的活化脂肪酸―脂酰CoA穿过线粒体内膜进入基质而被氧化分解。肉碱脂酰转移酶缺失症导致机体无法代谢脂肪酸。基于肉碱和脂酰辅酶A在乙莫克舍(Etomoxir)或丙二酰辅酶A(malonylCoA)存在与否的条件下,通过肉碱脂酰转移酶的作用,产生脂酰肉碱,并释放出巯基辅酶A(CoA-SH),与Ellman试剂5,5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸)[5,5’-dithiobis-(2-nitrobenzoicacid);DTNB]反应后,产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸(5-thio-2-nitrobenzoicacid;TNB),通过其吸收峰值的变化(412nm波长),来定量分析丙二酰辅酶A敏感性肉碱脂酰转移酶I的特异活性。肉碱脂酰转移酶I反应系统为:
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