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食物总抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量检测试剂盒

上传人: 上海科学仪器有限公司 |大小:39.5KB|浏览:1148次|时间:2018-11-19
食物总抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量检测试剂盒
文档简介

主要用途食物总抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量检测试剂是一种旨在通过有机氮自由基染料DPPH的参与,在抗氧化剂的存在下,通过分光光度仪,观察其峰值下降的变化,来定量检测对应于标准水溶性生育酚Trolox的总抗氧化能力,即消除自由基等值浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种新鲜组织(动物、人体、昆虫等)的总抗氧化能力检测。产品严格无菌,即到即用,操作简易,性能稳定。技术背景超氧自由基阴离子(superoxideradical;O2-)、过氧化氢(hydrogenperoxide;H2O2)、羟自由基或氢氧基(hydroxylradical;OH-)、过氧化基(peroxylradical;ROO-)、氢过氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxylradical)、氮氧基(nitricOxide;NO-)、过氧亚硝基阴离子(peroxynitriteanion;ONOO-)次氯酸(hypochlorousacid;HOCl)、半醌自由基(semiquinoneradical)、单线态氧气(singletoxygen)等细胞内活性氧族(ReactiveOxygenSpecies;ROS)的产生和增多,将导致细胞衰老或凋亡,甚而导致诸如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。在生物系统内,通过抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等,大分子,例如白蛋白、铜蓝蛋白(ceruloplasmin;CER)、铁蛋白(ferritin)和抗氧化因子,例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素(bilirubin)等,产生抗氧化能力,即捕获自由基的能力,达到消除或降低ROS的损害。通过稳定的有机氮自由基染料1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-Dipheny1-2-picrylhydrazylradical;DPPH),受到抗氧化剂的去自由基作用,呈现深紫色转化为黄色的变化,衡量体系中抗氧化剂捕获自由基、消耗抗氧化剂的能力,在分光光度仪(515nm波长)的帮助下,观察其峰值下降的变化,并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照。保存方式保存在-20℃冰箱里,有效保证6月用户自备50毫升烧杯:用于样品操作的容器15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器1.5毫升离心管:用于标准样品配制的容器4℃台式离心机:用于样品操作96孔板:用于比色的容器分光光度仪或酶标仪:用于比色分析实验步骤样品准备1、固态食品处理1.秤取1克固态食品或粉末到50毫升烧杯,杯口封口膜密封2.加入8毫升清理液(ReagentA)3.搅拌30分钟,充分混匀4.继续加入清理液(ReagentA)到终容量为10毫升5.过滤纸过滤,去除不溶性固体颗粒6.封口膜封口备用2、液态食品处理1.移取5毫升待测液态食品到15毫升锥形离心管2.放进台式离心机离心10分钟,速度为1500g3.移取上清液到新的15毫升锥形离心管4.(选择步骤)可以加入适量的清理液(ReagentA)5.(选择步骤)过滤纸过滤(如果离心处理,样品仍然不清澈)6.置于冰槽里备用或放进-20冰箱里保存标准液准备1.准备好5个1.5毫升离心管,标记为1至5号管2.移取50微升标准液(ReagentD)到1号管3.小心移取10微升缓冲液(ReagentB)和40微升标准液(ReagentD)到2号管,混匀4.小心移取20微升缓冲液(ReagentB)和30微升标准液(ReagentD)到3号管,混匀5.小心移取30微升缓冲液(ReagentB)和20微升标准液(ReagentD)到4号管,混匀6.小心移取50微升缓冲液(ReagentB)到5号管7.将1至5号管放进冰槽里备用,避免光照;标准管浓度见下表管号缓冲液(ReagentB)标准液(ReagentD)测定体系标准Trolox浓度10微升50微升300微摩尔/升210微升40微升240微摩尔/升320微升30微升180微摩尔/升430微升20微升120微摩尔/升550微升0微升0三、样品测读实验开始前,将-20冰箱里的试剂置于室温下融化,实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂置于室温下融化,移取5毫升染色液B(ReagentC2)到1瓶染色液A(ReagentC1)里,混匀,置于暗室里,标记为染色工作液,避免光照。然后进行下列操作。1.准备1个96孔板,做好标记:空白对照孔、标准对照孔、样品孔2.分别移取205微升缓冲液(ReagentB)到96孔板里的每个孔里3.分别加入25微升染色工作液4.加入20微升缓冲液(ReagentB)到空白对照孔5.加入20微升上述配制的标准液(ReagentD)到相应标准对照孔里6.加入20微升组织裂解样品(100微克食品总量)到样品孔里7.轻轻摇动96孔板,使其混匀8.室温下孵育15分钟9.即刻放进酶标仪里测读:515nm波长10.分析结果:1)构建标准曲线:纵座标(Y轴)为吸光单位(OD730nm);横座标(X轴)为标准Trolox浓度(微摩尔/升)2)空白对照孔为Zda吸光单位(OD515nm)读数3)标准对照孔和样品孔为实际吸光单位(OD515nm)读数4)根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度(微摩尔/升)5)计算样品实际总抗氧化能力【根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度(微摩尔/升)×0.25(体系容量;毫升)×样品稀释倍数】÷0.02(样品容量;毫升)=(微摩尔/升TROLOX等值)6)根据下列公式计算测定体系中样品量的总抗氧化能力(实际YZ百分率)【(空白对照孔吸光单位读数-实际吸光单位读数)÷空白对照孔吸光单位读数】×1**%7)IC50:50%YZ率所需的样品单位:TROLOX等值或样品重量(毫克/毫升)或样品容量(微升)×(所需样品单位)=(已知样品单位÷试剂YZ百分率)×50%
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