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免疫组化试剂盒使用说明书

上传人: 上海语燕生物技术有限公司 |大小:27.5KB|浏览:707次|时间:2018-11-19
免疫组化试剂盒使用说明书
文档简介

上海哈灵生物科技有限公司免疫组化试剂盒使用说明书保存方法:2-8℃保存。有效期:一年。生产日期:见封口。工作原理:辣根过氧化物酶(HRP)的分子量(40000),它不会遮盖抗原的结合部位,具有较高活性及特异性,可溶性佳,生成的产物不扩散,可作用于多种底物,产生不同颜色且HRP穿透力强,易进入细胞内。DAB在H2O2存在的情况下,可以作为HRP的电子供体,产生褐色的不溶颗粒,可作为显色的试剂。试剂盒内容:名称规格10.01mol/LpH6.0枸橼酸盐缓冲液0.5L2PBS缓冲液1L3广谱二抗1.5mL430%H2O25mL5DAB显色液I0.3mL6DAB显色液II0.3mL自备试剂:无水乙醇、苏木素。操作步骤:1.60℃常规脱蜡至水后,将石蜡切片先后浸入二甲苯Ⅰ,二甲苯Ⅱ各10min。然后逐级降浓度酒精入水,每次3-5min。①无水酒精3-5min②90%酒精3-5min③85%酒精3-5min④75%酒精3-5min⑤PBS洗涤3次每次5min2.热修复抗原:将切片置于0.01mol/LpH6.0枸橼钠缓冲液,微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10min后,反复1-2次,置于室温自然冷却。0.01mol/LpH7.0左右的PBS洗涤3次,每次5min3.消除内源性过氧化物酶:用3%H2O2室温孵育5-10min,以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗涤2-3次,每次5min;4.滴加一抗:滴加适当稀释的一抗到切片上,37℃孵育一定时间或者4℃隔天,pH7.4的PBS洗涤3次,每次5min。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)5.加入广谱二抗,37℃孵育一段时间,取出后PBS洗涤3次,每次5min。6.DAB显色:取DAB显色液I及II各50微升加至入1mL的水中,配成DAB工作液,滴加到切片上,室温显色,镜下控制反应时间。若无背景出现则可继续显色。蒸馏水充分洗涤以终止反应。7..观察显色后自来水冲,苏木精复染1-2min,,自来水冲10min,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片,干燥,分析拍照
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