细胞培养常规检查

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细胞培养常规检查(一)一般形态观察生长状态良好的细胞在普通显微镜下观察时可见，细胞透明度大，轮廓不清，只有用相差显微镜观察，才能看清细胞的细微结构。细胞内颗粒少、无空泡，胞膜清晰，培养上清液清澈透明，看不到悬浮细胞和碎片；细胞功能不良时，轮廓增强，胞质中常出现空泡、脂滴和其他颗粒状物，细胞之间空隙加大，细胞形态可变得不规则，甚至失去原有特点。只有生长状态良好的细胞才能用于实验。细胞生长过程中，CO2积累增多，由于培养液内含有pH指示剂，因此其颜色变化可间接反映细胞的生长状态。正常情况下，培养液呈桃红色；呈橙黄色时，细胞一般生长状态较好；呈淡黄色，则可能是培养时间过长、营养不足、细胞死亡过多；呈紫红色，则可能是细胞生长状态不好，或已死亡。（二）细胞增殖生长状态初代或传代培养时，都有一长短不同的潜伏期。传代细胞系、胚胎组织或幼体组织潜伏期短，一般在第二天即可见细胞生长，一周内便可连接成片。成体组织的潜伏期长，老龄组织和癌组织更长，有时可达一周左右。初代组织块培养法细胞生长，Zxian从组织“长”出的为游走细胞，它们多单独活动，形态不规则，用缩时逐格显微摄电影法可显示出极活跃的变形、游走和吞噬活动。在游走细胞之后，接着长出的是成纤维细胞或上皮细胞。只有当出现细胞分裂、细胞数量逐渐增多、形成较大生长晕或连接成片时，细胞才真正进入增殖状态。成纤维细胞是Z易生长细胞，生长速度较快，低倍镜下观察时，前哨部位细胞似火焰状或放射形状向外扩展；如接种为游走细胞、胶质细胞等细胞，在密度不大时，可连接成网状，只有细胞密度增大时才连接成片。上皮细胞排列紧密，相互接壤成膜状；上皮膜边缘整齐，细胞很少单独活动，生长时整个上皮膜发生移动。上皮细胞尤其是外胚层来源的细胞如表皮细胞等，生长过程中常产生溶解酶，能使细胞间质发生液化，导致细胞相互分离，严重时可导致细胞脱落，其确切机制尚不明了．可能与产生透明质酸酶有关。细胞接种后，经过悬浮期、潜伏期和指数增生期等后，Z终将长满瓶壁，如不及时做再培养，由于营养物质消耗和代谢产物积累，细胞即进入停滞期。此时细胞轮廓增强，细胞内常出现前述有膨胀线粒体形成的堆积物，细胞变得粗糙，严重时细胞从瓶壁脱落，只有及时做传代，才能使细胞继续生长。(三)微生物污染在长时间反复培养过程中，即使细胞培养用品消毒操作严密，也会偶尔发生细菌、支原体、真菌、病毒和其他杂质细胞污染，需随时注意，一旦发生污染，应及时进行处理。(四)培养液在正常情况下，培养液pH介于7．2～7．4，呈红色。用一般培养箱培养时，随细胞生长时间延长，CO2积累增多，在超过缓冲范围之后，营养液酸化逐渐变黄色，这时如不及时调节pH，会对细胞产生不利影响，严重时可使细胞退变死亡。培养液中加N-(2-羟乙基)N’-2-乙烷磺酸（N-2Hydroxyethylpiperazme-N’-2-ethanesulionicacid，HEPES)或用5％CO2温箱培养可使pH维持稳定。用含磷酸盐缓冲系统培养液时，可因瓶口漏气，CO2溢出，也可能由于培养瓶塞洗刷不洁，残留碱性物质所致，使之变为碱性而呈红色。更换营养液的时间，可依据营养物质的消耗而定，细胞生长旺盛时，2～3d更换一次；生长缓慢时，3～4d更换为宜。需特别注意，各种细胞对pH的要求不同。
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