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苏木精-伊红染色使用说明

上传人: 上海研生实业有限公司 |大小:21.5KB|浏览:3375次|时间:2018-11-26
苏木精-伊红染色使用说明
文档简介

苏木精-伊红染色使用说明【试剂配制】苏木精染液苏木精配方很多,现介绍常用的是Harris苏木精染液。苏木精1g95%乙醇溶液10ml钾矾或铵矾20g蒸馏水200ml0.5g冰醋酸8.0ml先将苏木精溶于乙醇溶液。钾矾加温溶解烧瓶后,将倒入,继续加热1min。加热停止后,缓慢加入0.5g,再继续加热煮沸1min。迅速将烧瓶移人冰水内。染液冷却呈深色时,加冰醋酸过滤后即可使用。棕色磨口瓶保存。室温保存2个月,4℃保存4个月左右。1.0%伊红染液将1.0g水溶性伊红溶100ml蒸馏水中,每100ml伊红液中加0.2ml冰醋酸。【实验步骤】(1)石蜡片经脱蜡、水化,单层细胞片经漂洗固定。(2)苏木素染液染5~10min(染色时间与温度、染液成熟度有关)。(3)自来水换数次,标本转为深蓝色。(4)分色:浸入1%稀盐酸乙醇液(100ml75%乙醇溶液中加1d盐酸)分色数秒钟至1min,脱去多余的蓝浮色,标本转为淡紫红色镜下呈紫红色,胞质无色或灰蓝色(后者为幼稚细胞)。(5)蓝化:自来水浸洗10min或数小时,甚至更长,标本从淡紫红色转为鲜艳的浅蓝色。注意:为缩短自来水浸洗时间,使苏木素更加显色,可将标本置淡氨水溶液(400ml自来水加氨水2滴)中10min,切片很快呈鲜艳的浅蓝色,经此处理的标本,要经自来水充分浸洗,否则会影响伊红染色。(6)蒸馏水漂洗。(7)伊红染液5~10min,进行对比染色。(8)用蒸馏水洗去玻片的浮色,经70%、80%、90%梯度乙醇溶液脱水各一次,再分别经95%、100%乙醇溶液脱水各两次,每次1min。(9)浸入二甲苯两次,每次1min。中性树胶封片【注意事项】(1)Harris苏木精染液即配即用,不能久存,宜少量配用。(2)HE染色时,除大批标本采取浸染外,一般以滴染为好。染液反复使用而被水稀释,使特异性染色和染色速度下降。(3)苏木精染液出现沉淀现象,是染液变质的一种指示,但滤液仍可使用一段时间。苏木精染液效力判断方法为:将苏木精染液滴人自来水中,若染液出现由紫红色变为蓝色的现象,即证实染液有效。(4)苏木精染色后,盐酸乙醇溶液分色是关键步骤:以细胞核染色清晰、细胞质基本无色为佳。核过染,延长分色时间;染色太浅,则应重新染色。(5)伊红染色后,低浓度乙醇溶液脱水后极易脱色:为防止此现象的发生,标本脱水至95%乙醇溶液后,再转入95%乙醇溶液配制的1%伊红液中复染3~5min分钟,然后继续脱水透明,可获得满意效果。(6)无水酒精脱水后,转入二甲苯中出现混浊现象,为脱水不彻底的表现。此时应退回乙醇溶液或更换100%乙醇重新脱水。(7)封片时,盖玻片要大于切片。切片裸露,标本很快褪色。(8)市售95%乙醇溶液常含杂质,只能用于脱水或清洁玻片。(9)二甲苯是一种易挥发的有毒液体,实验者要带眼罩、口罩、手套,在通风的地方操作。
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