一种快速、高通量的病毒中和抗体检测方法

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  新冠病毒的出现导致了世界范围内的新冠大流行，为了理解病毒的发病机理并开发疫苗，亟需快速开发多种研究工具。检测病毒感染和疫苗接种后的免疫反应对新冠病毒的研究十分重要。由于中和抗体是免疫反应和疫苗效价的关键生物标志物，患者血清样本中的中和性抗体水平是用于监测有效性的重要参数。 人体血清中和抗体的鉴定常使用传统方法例如蚀斑减少中和试验 (PRNT) 来检测。然而，该方法使用活的、具备感染性的病毒加入到靶细胞中，所以需要生物安全三级实验室以及耗时费力的细胞培养。数据结果的分析耗费时间并且不能自动化。此外，假病毒中和试验 (pVNT) 方法使用改良型的病毒，可以在生物安全二级实验室完成，但此方法需要细胞培养和荧光成像来测得中和抗体活性，因此，也不适用于样品的高通量筛选。[详细]

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  猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒说明书1符合率试验PCV2ELISA与间接免疫荧光检测方法（IIF）的比较由上表结果显示ELISA方法阳性检出率为63.3%,阴性检出率为36.7%；而用猪2型圆环病毒间接免疫荧光试验阳性检出率为59.2%,阴性检出率为40.8%。其中两种方法检测阳性符合率为90.3%,阴性符合率为94.4%，总符合率为91.8%。表明ELISA在测定抗体效价时较为敏感。注：间接免疫荧光检测方法（IIF）是实验室检测圆环病毒经典方法。PCV2ELISA与荷兰塞迪的捕获ELISA试剂盒（商品化）的比较用PCV2ELISA试剂盒检测117份猪血清，结果阳性率为72.65%，阴性率为28.35%。对比国外试剂盒检测结果，阳性率为70.94%，阴性率为29.06%。阳性符合率为64.96%，阴性复核率为21.37%，总符合率为86.32%。注；荷兰塞迪的捕获ELISA试剂盒（商品化）在国内使用的比较少，其效果还有待验证。猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒说明书使用说明书【简介】试剂盒由抗原包被的微孔板，酶标羊抗猪IgG及其它试剂制成，应用间接ELISA原理检测猪血清中抗Ⅱ型圆环病毒ORF2蛋白的抗体。【用途】猪圆环病毒2型ELISA抗体检测诊断试剂盒用于检测猪血清中抗Ⅱ型圆环病毒ORF2蛋白的抗体。评估猪场圆环病疫苗免疫状况。感染猪的血清学诊断。【原理】本试剂盒是采用猪圆环病毒2型ORF2基因的工程表达产物包被微孔板，在试验中，加入稀释的对照血清和待检血清，经温育后，若样品中含有抗猪圆环病毒2型ORF2蛋白特异性抗体，则将与检测板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，加入HF溶液终止反应后，用酶标仪630nm波长测定各反应孔中的OD值。【试剂盒主要成分】1包被抗原的微孔板2块（96孔/块）2阴、阳性对照血清各1管（1ml/管）3羊抗猪酶标二抗1瓶（30ml/瓶）420倍浓缩洗涤液1瓶（50ml/瓶）5底物A液、B液各1瓶（10ml/瓶）6终止液1瓶（10ml/瓶）7样品稀释液1瓶（50ml/瓶）8血清稀释板2块（96孔/板）9说明书1张【样品制备】取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。【洗涤液配制】使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解（**在37℃水中加热5-10min），然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释（例如：每板用20ml浓缩液加上380ml水），稀释好的洗涤液在4℃可以存放7天。【样品稀释】在血清稀释板中按1：40的体积稀释待检血清（195μl样品稀释液中加5μl待检血清）。注意：阳性和阴性对照1：4稀释，（180μl样品稀释液中加60μl对照血清，吹打均匀）。【注意事项】1试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用后放回2-8℃。2不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。3不要用口移液。4TMB（底物液B）不要暴露于强光，避免接触氧化剂。5检测板拆封后避免受潮或沾水（未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，应尽快置于2-8℃）。6待检血清样品数量较多时，应先使用血清稀释板稀释完所有要检测血清，再将稀释好的血清转移到检测板，使反应时间一致。7浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释，如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。8严格按照操作说明书可以获得**的结果，操作过程中移液，定时和洗涤等的全过程必须极ng确。猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒说明书【操作步骤】1取检测板（根据样品多少可拆开分次使用），用稀释好的洗涤液洗板2次（200l/孔）每次静置2分钟后倒掉，再在干净吸水纸上拍干。2取稀释好的待检样品100μl加入到检测板中；阴性对照和阳性对照各设2孔，每孔100μl；轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃温育30分钟。3甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗板3次，200μl/孔，每次静置3分钟倒掉，再在干净吸水纸上拍干。4每孔加羊抗猪酶标二抗100μl，置37℃温育30分钟。5洗涤5次,方法同3。切记每次在干净吸水纸上拍干。6每孔先加底物液A一滴（50l）、再加底物液B一滴（50l），混匀，室温（18℃-25℃）避光显色10分钟。7每孔加终止液1滴（50μl），10分钟内测定结果（检测前在震荡器上轻轻震动一下）。【结果判定】在酶标仪上测各孔OD630值。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630值大于或等于1.0，阴性对照孔平均OD630值必须小于0.3。样品OD630值大于0.42，判为阳性；样品OD630值在0.38到0.42之间，判为可疑；样品OD630值小于0.38，判为阴性。注意：用620~650纳米波长测定结果均有效。【贮存】2-8℃避光保存【有效期】6个月[详细]

  2018-09-14 10:01

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• Environ. Sci. Technol.：一种利用高光谱技术快速检测鱼肠道中的塑料微粒的方法

  近年来，保护环境的呼声愈发高涨，相关研究也在不断深入。自然环境中人造有害物质的发现与处理正逐渐成为研究的热点。调查发现，水生生物会随着进食而不断在体内积累塑料微粒（MPs），浓度过高时会导致生物死亡，这对生态系统产生了巨大的威胁。因此，寻找一种快速检测体内塑料微粒的方法将有利于及时针对性的治理当地的生态环境。目前，拉曼及红外光谱等技术已广泛应用于有机体中的物质检测，但以上方法均需要复杂的手段对组织与被测物进行分离，费时费力。而基于高光谱技术的新方案则可以实现原位直接扫描、定位，极大提升了检测效率。高光谱成像技术（HSI，Hyperspectral Imaging）有着极高的空间分辨率和光谱分辨率，可以轻松地获得视野内某一像素点的光谱信息，还具有极快的成像速度，可在短时间内完成某一区域的扫描，获得大量信息。今天与大家分享一篇发表在环境领域顶级期刊ENVIRONMENTAL SCIENCE & TECHNOLOGY上的文章。作者通过高光谱的快速成像功能，识别了鱼肠道组织中的多种塑料微粒，该方法快捷、简便、无需复杂的分离提纯手段，是高光谱技术应用的典型案例。 [详细]

  2022-05-10 10:57

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