土壤镶嵌

本文由 沈阳科晶自动化设备有限公司 整理汇编

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• 土壤镶嵌

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  腐殖酸的污染。土壤中，特别是森林，草地土壤含有非常丰富的腐殖酸。腐殖酸是一系列的有机物分子，部分分腐殖酸同核酸分子非常类似，在纯化过程中非常难于去除。微量的腐殖酸污染都会导致下游应用，如PCR，酶切的失败。裂解方法。土壤样品中含有各种微生物，如细菌和真菌等。革兰氏阳性细菌和真菌都含有非常厚的细菌壁，让这些微生物的细胞壁有效破裂是提取高产量宏基因组DNA的关键。由于土壤样品的复杂性，使用酶法（如溶菌酶，破壁酶，蜗牛酶）或液氮研磨都不可行，因为土壤中含有各种金属离子或YZ因子导致消化酶的活性失活，或土壤中的沙粒等会导致液氮研磨很难进行。土壤DNA提取的解决简介土壤样品含有大量的微生物，其中绝大部分的微生物都是无法直接培养进行繁殖和研究。从土壤样品中提取DNA是研究土壤微生物Z为有效的方法。目前从土壤样品中提取微生物DNA的方法主要有直接法和间接法。直接法是指把土壤样品放在裂解液中，经过有效的破壁方法使微生物的DNA全部释放到裂解液中，然后再进行分离提取，如Zhou的方法。间接法是指将土壤放在一种的缓冲液中，如BufferPBS等，把微生物从土壤中分离出来，然后再进行DNA的提取。间接法可大大降低土壤中腐殖酸，重金属盐对DNA提取带来的影响，但是这种方法会丢失许多微生物，得到的DNA并非土壤样品中的全基因组（宏基因组），目前已经很少研究者会采用这种方法。从土壤样品中直接提取DNA可Zda可能性地获得全基因组，但是这种方法却面临以下几个问题：1.2.3.DNA得率难于控制。土壤样品或因肥沃，或因贫瘠，或因含水量丰富，或因干枯，或因取样的深浅度，都会造成微生物数量和品种发生剧烈改变。在一个小范围的土壤样品DNA含量往往会差别成千上百倍。此外，某些土壤中含有的化学成分，如重金属盐，粘土物质都会造成DNA得率降低。OmegaBiotek公司的E.Z.N.A.SoilDNAKit是目前土壤DNA提取Z为优化的试剂盒。该试剂盒采用玻璃珠研磨法和热激化学破壁法，可不需特殊的珠磨仪，在点动涡旋仪就可进行，适合于广大的研究室。试剂盒中HTRReagent是OmegaBiotek公司du家开发的腐殖酸吸附剂，能GX去除各种腐殖酸的污染。此外还采用无醇的硅胶柱纯化方式，可GX去除土壤中各种可溶性金属盐，以及其它可溶性的YZ因子。该试剂盒已经成功地提取如下土壤（部分是客户反馈）：自然保护区森林的土壤（长达30-40年森林土壤，表层有30-50cm落叶层），红树林土壤，草地，耕地，海底泥，污泥，矿石区泥土，有机物污染的泥土，池塘泥，垃圾泥，空调管道堆积物等。实验方法为表明该试剂盒的优势性，我们选择以下不同组织样品进行DNA提取实验，每个样品重复3次。l森林类样品：自然保护区森林土壤（广东黑石顶自然保护区）和海南岛红树林保护区l矿石区样品：矿石区水底土壤（湿）和矿石区地表土壤（干）l耕地样品：稻田土壤，菜地土壤l有机物污染地表样品：污水沟衍泥和生活垃圾堆放区操作方法（按SoilDNAKit试剂盒进行）简单描述以下：1.取▲0.5g森林土壤/耕地土壤，或◆4g矿石区土壤和有机物污染土壤至15ml离心管中；2.加入▲0.5g酸洗玻璃珠，或◆4g酸洗玻璃珠；3.加入▲1mlBufferSXLMLus，或◆8mlBufferSXLMLus；4.立即在涡旋仪上Z高速涡旋3分钟。5.加入▲100ul，或◆800ulBufferDS，涡旋15s混匀6.转移至预热至70oC水浴锅中，水浴10-15分钟。7.3000xg离心3分钟，转移▲800ul，或◆7ml上清，并加入▲270ulBufferSP2或◆2.3mlBufferSP2，涡旋混匀；8.▲10,000xg离心5分钟，或◆5，000xg离心10分钟；9.把上清液转称至新的2ml/15ml离心管中，加入0.7倍的异丙醇。（在处理矿石区样品时和有机物污染的样品中，还加入133ul糖原溶液），涡旋混匀；10.▲10,000xg离心5分钟，或◆5，000xg离心10分钟沉淀收集DNA。11.倒弃上清液，并反扣于吸水纸上5分钟；12.加入200ulElutionBuffer，涡旋5秒。65℃水浴20-60分钟，让DNA充分溶液。13.加入50ulHTR,反应2min后，离心，取上清。14.上清加入等体积（约200ul）XP2Buffer，均匀后上柱。15.加入300ulXP2Buffer，洗涤一次。16.加入700ulSPWWashBuffer，洗涤两次。17.空甩后，加入适当量的ElutionBuffer洗脱即可。实验结果1.DNA电泳结果取10ul纯化的基因组DNA上样于0.8%琼脂糖凝胶，80V电泳30分钟，结果如下。0.5g森林类土壤样品（前两个自然保护区森林土壤，后两个为红树林土壤）0.5g耕地类土壤样品A:水稻田土壤B:玉米土壤4g有机物污染土壤样品A:生活垃圾堆放地B:污水沟底泥4g矿石泥1和3是两个矿石区水底土壤（湿）2和4矿石区地表土壤（干）相关附录【omega】基因组DNA抽提试剂盒系列　Se全血DNA小量提取试剂盒：从小于1ml血液样品中纯化2-30ug淋巴细胞基因组DNAD3471-00SEBloodDNAKit（20）150D3471-01SEBloodDNAKit（50）300D3471-02SEBloodDNAKit（200）1000全血DNA小量提取试剂盒：从小于250ul血液样品中纯化2-30ugDNA，包括寄生的病毒等基因组DNAD3392-00BloodDNAKit（5）108D3392-01BloodDNAKit（50）720D3392-02BloodDNAKit（200）2610全血DNA中/大量提取试剂盒：从小于10ml、20ml血液样品中纯化200-250ug或400-600ug基因组DNAD3494-01BloodDNAMidiKit（10）495D3494-03BloodDNAMidiKit（50）2250D3494-04BloodDNAMidiKit（100）4320D2492-01BloodDNAMaxiKit（5）450D2492-02BloodDNAMaxiKit（20）1710D2492-03BloodDNAMaxiKit（50）3600[详细]

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  土壤测量仪/土壤养分速测仪/土壤化肥速测仪/测土配方施肥仪型号:DP-369功能简介：*全国du家《机箱/药剂一体式铝合金机箱》设计，便于携带、坚固耐用。*可检测土壤及化肥、有机肥、植株中的SX氮、SX磷、有效钾、全氮、全磷、全钾、有机质含量，土壤酸碱度（定性），可对70种全国农业、果树、经济作物的目标产量计算推荐施肥量。*数字化线路、程序化设计，Z*程度降低操作者的失误和劳动强度。*暗盒部分采用五通道、双光路、串列式结构设计，无机械位移及磨损，光路测试定位极ng确，保证测定结果精度。*采用高亮度LED灯作为光源，硅半导体作为信号接收系统，寿命长达10万小时级别。光源稳定，一致性好。*采用液晶中文大屏幕显示，中文菜单提示操作，指导操作流程。*配备嵌入式微型打印机，具有打印功能。*供电采用单孔式独立插座，可接入220V交流电、汽车点烟器电源、太阳能电源或者其他任意7.5V-35V直流电源。技术参数：1、养分测量技术参数：(1)稳定性：A值（吸光度）三分钟内飘移小于0.003(2)重复性：A值（吸光度）小于0.005(3)线性误差：小于3.0%(4)灵敏度：红光≥4.5×10-5；蓝光≥3.17×10-3(5)波长范围：红光620±4nm；蓝光440±4nm(6)抗震性：合格(注:上述技术参数均高于国家标准)2、电源：(1)交流市电：180V～240V、50赫兹，(2)直流可接汽车点烟器电源、太阳能电源或者其他任意7.5V-35V直流电源。[详细]

  2018-09-24 10:01

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