压力循环技术(PCT)为弗兰克氏菌蛋白的研究提供方便
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Frankiaaregram-positive,filamentous,nitrogen-fixingactinobacteriathataresymbioticwithover200differentspeciesofplants.Frankiaproducethreecelltypes:vegetativehyphae,sporeslocatedinsporangia,andtheuniquelipid-envelopedcellularstructures,termedvesicles.Vesiclesareformedinsideplantcellnodules,orincultureundernitrogenlimitingconditions,andactasspecializedstructuresforthenitrogenfixationprocess.Thematurevesicleissurroundedbyanenvelopethatextendsdownthestalkofthevesiclepastthebasalseptum,whichseparatesthevesiclefromthehyphae.TechniqueshavebeendevelopedfortheisolationandurificationofintactvesiclesfromFrankiagrowninculture[1,2,3].Initialinvestigationsonthepropertiesofpurifiedvesicleshavefocusedonnitrogenmetabolism[3,4].Proteinextractionfromvesicleshashistoricallybeendifficultandasignificantbottlenecktoproteomicstudiesbecausevesiclesareresilientstructuresthataredifficulttodisrupt.ReliableandcomprehensiveproteomicmapsofFrankiahyphaeandvesiclescanonlybeassuredwhenproteinsareisolatedreproduciblyandinamannerinwhichtheyareaccuratelyrepresentedinthedownstreamanalysis.Forexample,2DGEcanbeanaccuraterepresentationofaproteomeonlyiftheentireproteinconstituencyofcellsisrecoveredduringthesamplepreparationprocess.WhileFrenchpresstreatmenteffectivelylyseshyphae,itfailstodisruptFrankiavesicles.PressureCyc领Technology(PCT)usedincombinationwithaspecializedlysisreagenteffectivelydisruptedpurifiedvesiclesenab领furtherinvestigationoftheproteomeofthevesicles.
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