细胞凋亡检测试剂盒POD法
- 上传人： 上海索宝生物科技有限公司 |大小：50KB|浏览：2450次|时间：2018-09-02
-
- 文档简介
- 您可能感兴趣的资料
-
支原体PCR检测试剂盒 灵敏度高 使用方便 涵盖所有支原体种类，能在2-3小时内获得可靠的结果。特点：①特异
-
美国Abraxis公司三聚氰胺检测试剂盒检测方法
-
-内酰胺酶检测试剂盒
-
超氧化物歧化酶对抗肿瘤药物促宫颈癌Hela细胞凋亡的影响
-
鲤鱼卵黄蛋白原ELISA检测试剂盒
-
用99Tcm-rh-Anexin V检测放疗或化疗后肿瘤细胞凋亡
-
牛奶中抗生素残留检测试剂盒的研制及应用
-
人细胞凋亡YZ因子(IAP)ELISA试剂盒
-
人细胞凋亡YZ因子(IAP)ELISA试剂盒
-
梅毒抗体检测试剂盒（胶体金法）
六折特价细胞凋亡检测试剂盒POD法产品简介：产品编号品名/Packsize的11684817910在原位细胞凋亡检测试剂盒，过氧化物酶1包（高达50测试）优点敏感：细胞凋亡（细胞染色）标签的Zda强度高于缺口翻译方法快速：使用荧光的dUTP允许后直接TUNEL反应，但在此之前的二次检测系统除了对样品的分析方便：直接标记程序，使用荧光素-dUTP标记允许在检测过程中的TUNEL反应效率的核查准确：在分子水平（DNA链断裂）和细胞凋亡的早期阶段的细胞识别凋亡鉴定灵活：无基板;提供了选择的机会，选择染色过程六折特价细胞凋亡检测试剂盒POD法6380元六折特价【021-54100800】InSituCellDeathPOD细胞凋亡检测试剂盒POD法上海索宝特价【021-54100800】产品明细：一、原理：TUNEL（TdT-mediateddUTPnickendlabe领）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是荧光素（fluorescein）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdTEnzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radishperoxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与HRP底物二氨基联苯胺（DAB）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因而没有3‘-OH形成，很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。二、器材与试剂器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等；试剂：试剂盒含TdT10×、荧光素标记的dUTP1×、标记荧光素抗体的HRP；自备试剂：PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、70%）、DAB工作液（临用前配制，5μl20×DAB+1μL30%H2O2+94μlPBS）、ProteinaseK工作液（10-20μg/mlin10mMTris/HCl，pH7.4-8）或细胞通透液（0.1%TritonX-100in0.1%sodiumcitrate，临用前配制）、苏木素或甲基绿、DNase1（3000U/ml3U/mlin50mMTris-HCl，pH7.5，10mMMgCl2，1mg/mlBSA）等。三、实验步骤操作流程图：制作石蜡切片→脱蜡、水合→细胞通透→加TUNEL反应液→加converter-POD→与底物DAB反应显色→光学显微镜计数并拍照。具体操作步骤（石蜡包埋切片的检测）：1.用二甲苯浸洗2次，每次5min；2.用梯度乙醇（100、95、90、80、70%）各浸洗1次，每次3min；注：上面两步是针对石蜡切片样本的处理4.用ProteinaseK工作液处理组织15-30min在2137°C（温度、时间、浓度均需摸索）或者加细胞通透液8min；5.PBS漂洗2次；6.制备TUNEL反应混合液，处理组用50μlTdT+450μl荧光素标记的dUTP液混匀；而阴性对照组仅加50μl荧光素标记的dUTP液，阳性对照组先加入100μlDNase1，反应在15~25℃×10min，后面步骤同处理组。7.玻片干后，加50μlTUNEL反应混合液（阴性对照组仅加50μl荧光素标记的dUTP液）于标本上，加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃×1h。8.PBS漂洗3次；9.可以加1滴PBS在荧光显微镜下计数凋亡细胞（激发光波长为450~500nm，检测波长为515~565nm）；10.玻片干后加50μlconverter-POD于标本上，加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃×30min。11.PBS漂洗3次；12.在组织处加50~100μlDAB底物，反应15~25℃×10min；13.PBS漂洗3次；14.拍照后再用苏木素或甲基绿复染，几秒后立即用自来水冲洗。梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。15.加一滴PBS或甘油在视野下，用光学显微镜观察凋亡细胞（共计200~500个细胞）并拍照。可结合凋亡细胞形态特征来综合判断（未染色细胞变小，胞膜完整但出现发泡现象，晚期出现凋亡小体，贴壁细胞出现邹缩、变圆、脱落；而染色细胞呈现染色质浓缩、边缘化，核膜裂解，染色质分割成块状/凋亡小体）对于.培养细胞的预处理：①在载玻片上铺一层薄薄的多聚赖氨酸（见备注4），干燥后在去离子水中漂洗，干燥后4℃保存；②适当方法诱导细胞凋亡，同时设未经诱导的对照组，各组离心收集约1×106个细胞，PBS洗一次，重悬，加到铺好的多聚赖氨酸载玻片上，自然干燥，使细胞很好的吸附到载玻片上；③将吸附细胞的载玻片在4%多聚甲醛（见备注2）中固定25min；④PBS浸洗二次，每次5min；⑤将吸附细胞的载玻片在0.2%的TritonX-100（见备注5）中处理5min；⑥PBS浸洗二次，每次5min；后续操作如同石蜡包埋切片的615四、注意事项1.进行PBS清洗时，每次清洗5min。2.PBS清洗后，为了各种反应的有效进行，请尽量除去PBS溶液后再进行下一步反应。3.在载玻片上的样本上加上实验用反应液后，请盖上盖玻片或保鲜膜，或在湿盒中进行，这样可以使反应液均匀分布于样本整体，又可以防止反应液干燥造成实验失败。4.TUNEL反应液临用前配制，短时间在冰上保存。不宜长期保存，长期保存会导酶活性的失活。5.如果20×DAB溶液颜色变深成为紫色，则不可使用，需重新配制。6.用甲基绿（MethylGreen）染液（3-5%甲基绿溶于0.1M醋酸PH4.0）染色后，请用灭菌蒸馏水清洗多余的甲基绿。然后进行洗净（1**%乙醇）、脱水（二甲苯）透明、封片后通过光学显微镜观察操作。如果此时使用80~90%的乙醇洗净时，甲基绿比较容易脱色，注意快速进行脱水操作。7.荧光素标记的dUTP液含甲次酸盐和二氯钴等致癌物，可通过吸入、口服等途径进入机体，注意防护。8.试剂保存；未打开的试剂盒贮存在-20℃（-15~25℃）；converter-POD液一旦解冻，以后就保存在4℃（2~8℃）下，至少在6m内稳定，避免再次冻存；TUNEL反应液临用前配好后，放至冰上直至使用。9.结果分析时注意：在坏死的晚期阶段或在高度增殖/代谢的组织细胞中可产生大量DNA断，从而引起假阳性结果；而有些类型的凋亡性细胞死亡缺乏DNA断裂或DNA裂解不完全，以及细胞外的矩阵成分阻止TdT进入胞内反应，进而产生假阴性结果。六折特价细胞凋亡检测试剂盒POD法上海索宝特价【021-54100800】InSituCellDeathPOD细胞凋亡检测试剂盒POD法上海索宝特价【021-54100800】ShanghaisolarbioBioscience&TechnologyCo.,LTD上海索莱宝生物科技有限公司是一家集销售生化试剂、实验耗材、自产分子生物学产品为一体，并能提供技术支持的专业性生物科技公司。公司秉承“以客户为ZX，以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念，在依靠客户的大力支持和员工的不懈努力下获得了快速的成长。公司组织结构清晰，内部管理科学，拥有一支既分工细致又高度合作的年轻化队伍，保持了各个部门之间的GX合作运转，充分保障了公司在充满竞争的市场中处于领xian地位。公司注重与业界精英合作，目前公司已经和Amersham、Amresco、Axygen、BD、Corning、Dragon、Eppendorf、等企业结成紧密的合作伙伴关系，代理其领xian世界的产品，并在全国各地设有分销机构。我们将以高度的责任感和出色的产品质量为客户提供高品质的产品和实验技术解决方案。丰富的经验、优良的品质、充足的库存、准确的交货时间、极具竞争力的价格，所有这些都保证了我们向您提供的是Z专业Zyou质的服务！立足北京，上海，辐射全国，随着产品营销战略的不断延伸，我们将逐步发展成为yi流的专业性生物科技公司。我们希望能够和尊敬的客户一起，利用各自的资源优势和勇于进取的敬业精神，为ZG生命科学研究的发展作出更多的贡献。为了更好、更全面的发展，现公司正在诚招各地dai理商和招聘若干销售、研发人员，欢迎垂询并期待您的加入！六折特价细胞凋亡检测试剂盒POD法上海索宝特价【021-54100800】联系方式上海索莱宝生物科技有限公司电话：021-6485566518018609966传真：021-54261506邮编：200233地址：上海市钦江路15号14层邮箱：solarbio@126.com网址：www.shsolarbio.com优质试剂质量放心价格Zdi为ZG生物产业做贡献六折特价细胞凋亡检测试剂盒POD法上海索宝特价【021-54100800】手机18018609966
标签：
