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聚团细胞!我该拿你怎么办?!

来源:深圳市瑞沃德生命科技有限公司 浏览量:126次
由【深圳市瑞沃德生命科技有限公司】举办的【聚团细胞!我该拿你怎么办?!】将于【2020-09-11】在【广东 深圳 南山区西丽街道西丽社区留新四路万科云城三期C区九栋A座1901房】召开,主讲人【】,欢迎业内人员踊跃参加!

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不知道你有没有注意到:细胞消化过后,仍有些细胞分散不开,吹又不敢吹,弃又弃不净?结果聚团细胞像滚雪球一样越聚越大、越聚越多?此时只想说一句:

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细胞聚团到底是不小心污染了?还是操作失误?聚团细胞该怎么计数?

One

为什么细胞喜欢“抱团”

首先要明确一点,常规的“抱团”是指贴壁细胞被消化后悬浮状态下的聚集情况。细胞在贴壁生长时,聚集在一起是正常现象。当周围细胞寥寥无几,而这一团已经叠层生长,这就是在悬浮状态就已经聚团的细胞再贴壁导致的。相同条件下,培养的癌细胞对密度依赖性的生长抑制敏感性降低,所以即使在形成单层后,也不会停止生长,而是相互堆积形成多层生长的聚集体。

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其次,部分细胞被污染后会出现细胞聚团,这和操作有很大关系,比如:传代铺板时,是否进行了活细胞计数并及时调整浓度;终止消化时间点是否准确;混匀是否过于轻柔或粗暴;胰酶是否浓度过高;离心收集时,加速度是否过大等,都会直接影响子代细胞状态。

另外,过度消化细胞、状态不好的老化细胞也可能会出现聚团。很多人觉得细胞多多益善,经常将贴壁细胞养到叠层、或密集程度特别高时才进行传代,如果一直这样,不仅会缩短传代时间,导致操作密集;同时细胞的老化会更加严重。另外,细胞死亡时释放DNA,会“抓住”其他细胞,形成黏性的细胞团,若不及时处理,整体细胞状态会恶性循环。

Two

聚团细胞状态都不好吗

若细胞轮廓清晰,胞体通透,呈串状均匀聚集,证明其状态较好,正在分裂。但是大多数情况下,聚团细胞都是轮廓模糊,细胞透光性差,甚至出现合胞体,同时伴有细胞碎片,这证明细胞已经衰老或者产生病变,状态不佳。

Three

如何避免聚团细胞的生成

首先确认当前细胞生长密度及状态,80%左右的生长密度即可进行传代,此时细胞状态较好,且用于传代的数量也足够。

传代操作前,使用缓冲液对细胞进行适当且全面地润洗,清除死亡的细胞团和部分堆叠杂质(在选择适当胰酶浓度时,对于不同代数的不同细胞系需进行一定的调整,如:部分贴壁牢固的细胞应将胰酶分装后,进行预热处理;细胞密度过高时,应该向胰酶中加入少量缓冲液,缓慢均匀地消化细胞等。对于贴壁格外牢固的细胞,可以尝试多次分批进行消化,最大限度保证细胞状态)。

在消化过程中,需均匀慢速晃动培养器皿,以免局部胰酶浓度过高而影响传代。切勿用力摇动,导致边缘松动的大片细胞直接脱落,从而增加细胞成团几率。

培养器皿的选择也需注意,部分实验室会使用玻璃培养瓶,因细胞贴壁在玻璃底更容易分离。同时玻璃材质的亲水性和塑料有区别,而且玻璃细胞培养瓶都是实验室内部处理,可能会有清洁残留,在一定程度上抑制细胞的贴壁生长,并且更容易消化,细胞之间的连接比贴壁还要紧密,聚团几率很大。

另外,避免传代过程中汇合度较大,本身1:3甚至1:4都可以正常培养的细胞被1:2传代,会导致母代细胞浓度过高,在分化过程中出现堆叠现象,所以在每次细胞传代前要对细胞进行计数。

Four

已经聚团的细胞,只能弃掉吗

如果预实验比较紧急,或者细胞株较为珍贵,也可以在复苏新细胞的同时,进行聚团细胞“拯救”。

首先,将带有聚团细胞的样品低密度连续传代,约三代过后,可逐渐分散为独立个体,再通过监测细胞活力状态,判断是否可用来进行下游实验。若肉眼可见,即可直接通过清洗和吸出,或是在消化后将悬起的细胞样品静置数十秒以沉淀团块。对于死细胞聚团,可以在细胞液中适量加入DNase以断裂DNA。

其次,若发现珍贵细胞株虽有聚团,但对整体生长无明显影响,短期不会做其它处理,只是计数时较为麻烦,怎么办?人工手动计数准确度无法保证,且血细胞计数板中一旦出现聚团细胞,样品需要重新制备,有没有可以对带有聚团细胞分析的自动细胞计数仪呢?

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2020-09-08 17:34:36
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