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• 2023-06-05 11:52发布了行业资讯

  展会邀请|锘海诚邀您参加第七届细胞生物产业大会

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• 2023-04-19 14:07发布了行业资讯

  新闻速递 | 锘海春季巡讲系列讲座及实操培训

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• 2023-03-29 10:49发布了行业资讯

  锘海入选上海市2023年第一批科技型中小企业榜单

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• 2023-03-23 11:24发布了行业资讯

  锘海LS18平铺光片显微镜简介

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• 2023-03-22 11:13发布了行业资讯

  全新生物组织透明化试剂盒(水性)&生物组织膨胀试剂盒

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• 2023-03-22 11:10发布了行业资讯

  如何实现纳米药物的靶向递送？

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• 2023-02-17 13:16发布了行业资讯

  核酸脂质纳米粒科普——RNA-LNP包封率测定

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• 2023-02-17 13:16发布了问答

  核酸脂质纳米粒科普——RNA-LNP包封率测定

  自新冠mRNA疫苗成功上市以来，脂质纳米粒（Lipid nanoparticle，LNP）已成为mRNA、siRNA、pDNA等核酸的优先递送载体，广泛用于mRNA疫苗及治愈。微流控技术是目前制备核酸脂质纳米粒常用的技术，包封率则是评价其制备效果的重要指标之一，下面就为大家介绍使用RiboGreen测定RNA-LNP包封率的方法。1 RiboGreen检测RNA-LNP包封率的原理1.1RNA-LNP包封率（Encapsulationefficiency，EE）：包裹在脂质纳米粒内部的RNA占RNA-LNP溶液中全部RNA的比例。1.2 RiboGreen检测RNA原理：RiboGreen是一种用于定量检测溶液中RNA含量的超敏感荧光核酸染料，当RiboGreen荧光染料处于溶液状态时，几乎没有荧光活性，与RNA结合时，其荧光活性将增加1000倍。RiboGreen-RNA复合物的荧光激发波长约500nm，发射波长约525nm，通过酶标仪，建立已知浓度RNA的标准曲线，即可得到样品RNA浓度。1.3 RiboGreen检测包封率原理：分别测定LNP-RNA溶液中游离RNA浓度，以及用Triton-100破坏LNP结构后，溶液中全部的RNA浓度，两者的差值就是包封在LNP内部的RNA浓度。通过以下公式即可计算得到包封率结果。图1核酸脂质纳米颗粒的示意图2操作要点2.1制备Buffer1X TE Buffer：使用试剂盒中20X TE Buffer稀释。2% Triton-TE buffer：使用Triton-100与1X TE buffer以体积比1：50配制。2.2添加RNA-LNP样品至全黑96孔板根据制备时RNA的量，可以大致计算需要稀释的倍数。例如，已知 mRNA的原始质量或浓度，使用铭汰MicroFlow S进行RNA-LNP合成，根据稀释、超滤等处理后的最终体积，即可估算大致总RNA浓度。同时，假设90%的包封率，即可估算游离RNA浓度。然后根据标曲的浓度计算需要稀释的大致倍数。这样我们就可以使用1X TE buffer将RNA-LNP稀释适合倍数以检测LNP外游离RNA浓度，使用2% Triton-TE buffer将RNA-LNP稀释适合倍数以检测总RNA浓度，建议每项检测至少两个不同稀释倍数。然后，分别移取100 μL稀释后的样本，添加到全黑96孔板。2.3标样添加一般直接使用试剂盒中100 μg/mL的RNA标样，也可以使用与待测样本类似的RNA标样来建立标准曲线。可以先用1X TE buffer将原始标样稀释到工作浓度4 μg/mL，然后参考表1的体积比，配制为一定浓度梯度的标样。分别移取各浓度的标样100 μL，添加到全黑96孔板中。注：*最终RNA浓度考虑了步骤2.4添加RiboGreen染料后的浓度当RNA-LNP样品及特定浓度的标样添加到96孔板后，需要在37℃下避光孵育10 min，以使RNA-LNP在Triton buffer中充分裂解。2.4 RiboGreen染料添加把试剂盒中RiboGreen试剂，使用1X TE Buffer按照1：100的比例稀释，例如需要2000 μL RiboGreen染料，可将20 μL的RiboGreen试剂添加到1980 μL的1X TE Buffer中。然后各取100 μL加入到已经加有样品的96孔板中，37℃下避光孵育5min。图2 样品添加2.5酶标仪检测打开酶标仪，选择荧光模式，激发光485nm，发射光528nm，读数，记录数据。 2.6数据处理及分析    将每个样本测得的荧光值减去空白荧光值，即可得到实际荧光值。根据标样的荧光值和浓度梯度，绘制标准曲线，得到回归方程。把样品荧光值代入回归方程，乘以稀释倍数，即可得到样本的RNA浓度。根据1.3中包封率公式计算得到包封率结果。图3 标准曲线3 小结准确的包封率测定对于评价RNA-LNP的包封效果至关重要，影响着后续细胞实验和动物实验的开展。RNA-LNP包封率测定一般使用商业化的试剂盒，虽然操作环节较多，但只要细心规范，操作起来也并不难，相信大家可以得到准确的实验结果。纳米药物制备系统应用范围：

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• 2023-02-13 10:39发布了行业资讯

  组织透明化与点击化学相结合的新技术CATCH

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• 2023-02-13 10:39发布了问答

  组织透明化与点击化学相结合的新技术CATCH

  在完整组织中观察药物靶点相互作用的工具一直是理解体内药物作用的主要障碍。2022年发表在Cell上的题为“Insitu identification of cellular drug targets in mammalian tissue”的文章有突破性进展，作者通过修改和整合点击化学（CC）与组织透明化技术，开发了一种方法——透明辅助组织点击化学（Clearing-Assisted Tissue Click Chemistry，简称CATCH），允许小分子药物-靶点相互作用在亚细胞分辨率下进行标记和成像(图1A)。该技术为组织中小分子的体内相互作用可视化提供了一个有价值的平台，并能够识别药物在哺乳动物组织中的分布和参与。图1 CATCH技术的方法开发1.组织透明化极大地改善了哺乳动物组织中的化学标记作者对小鼠给药脂肪酸酰胺水解酶（FAAH）缓聚剂PF7845-yne（末端含炔基），通过CuAAC点击化学反应，炔基与荧光标签的叠氮化物反应形成叠氮炔环，进而引入荧光基团。初始试图直接成像药物结合的FAAH，但由于信噪比较差，未能显示细胞靶标。因而猜测脑组织构成复杂，其致密的脂膜可能影响点击化学反应，作者测试了基于聚丙烯酰胺的水凝胶组织透明化方法CLARITY，结果发现去除脂质后显著提升了成像的信噪比（图1C、D）。作者同时也验证了其他的透明化方法也得到了类似的效果（图1E）。此外，作者还比较了不同的点击化学配体（TBTA，BTTAA，BTTP）及不同的铜离子浓度下的反应效率，发现使用BTTP，150 μM硫酸铜条件下可获得高信噪比且稳定的成像（图1B）。2.CATCH实现了药物-靶点接触的全脑、亚细胞原位成像为了验证CATCH应用的广泛性，作者对三种小分子药物FAAH缓聚剂PF7845-yne、BIA10-2474-yne和单胺氧化酶（MAO）缓聚剂Pargyline-yne进行CATCH成像，结果清晰展示了药物-靶点在小鼠不同脑区的分布（图2A-E）。另外，还可以展示这些分子主要靶向的细胞类型，FAAH缓聚剂主要靶向新皮质和海马中的神经元样结构;而Pargyline-yne主要结合全脑的血管样结构，少量下丘脑和脑桥内稀疏但特异标记的神经元样结构（图2F）。图2 全脑药物结合的可视化2.CATCH可与荧光标记复合以识别靶细胞类型作者在给药处理后进行NeuN免疫染色，发现PF7845-yne和BIA10-2474-yne主要与新皮质、海马和杏仁核中的NeuN+神经元共定位。而在脑桥中发现了一小群神经元样结构，它们是NeuN阴性但被 pargyline-yne 靶向的（图3A-D）。随后作者洗脱NeuN并重新孵育TH抗体验证该推测，确定了NeuN-，Pargyline-yne阳性的细胞的确是LC-NA神经元（图3E）。由此证明，CATCH可以和荧光标记结合揭示了药物结合的细胞类型，并且可以区分神经元不同部分的药物靶标参与位点，可以支持多轮的药物靶向细胞类型鉴定。图3 药物靶点的细胞型鉴定锘海团队自主研发的组织透明化试剂盒可以高效地进行脱色脱脂，采用亲水性温和环境的设计，在组织荧光保护、样本形态维持、降低自发荧光等方面表现出比较优异的性能，适用范围广、操作简便、速度快、效率高。

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• 2023-02-07 16:17发布了行业资讯

  锘海成功入选“2022年上海创新型中小企业”

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• 2023-02-07 16:17发布了问答

  锘海成功入选“2022年上海创新型中小企业”

  上海市经济和信息化委员会开展了2022年创新型中小企业评定工作，已于1月16日公示通过审核的企业名单，锘海生物科学仪器（上海）有限公司成功入选“2022年上海市松江区创新型中小企业”什么是创新型中小企业「上海市创新型中小企业」是根据《上海市优质中小企业梯度培育管理实施细则》（沪经信规范〔2022〕8号），经过严格的专家评审和综合评估后，符合认定标准并予以认定、公示的一项重要资质。该榜单的入选标志着锘海进入优质中小企业培育库，展现出锘海具有较高专业化水平和较强创新能力和发展潜力，同时表明锘海主营业务和发展符合国家产业政策及相关要求。此次入选上海市创新型中小企业，是政府与行业对锘海技术水平、研发能力、业务发展及综合实力等方面的认可和肯定。锘海也将紧跟科技和产业发展前沿，持续加大研发投入，加快技术突破，为行业发展提供源源不断的创新动能，一如既往的为用户提供更加专业、便利的产品和服务。关于锘海锘海生命科学成立于2017年，2020年获得国家高新技术企业资质。总部位于上海漕河泾开发区松江园区内，在北京，广州，成都，沈阳等十余座城市设有办事处。作为“生命科学的服务者，医疗创新的推动者“，致力于打造完整的生命科学仪器研发、制造、服务体系。我们积极推进科学技术转化，在大组织3D荧光成像中，处于光片显微镜行业的先进地位，自主研发的LS18平铺光片显微镜解决了传统光片显微镜中空间分辨率、光学层析能力和成像视野大小之间的矛盾，满足高通量、准确定位的荧光成像分析需求。此外，锘海还有纳米药物制备系统及纳米药物制备、检测服务—从筛选到制剂表征全线过程，适用于临床前研究和符合GMP的临床生产，目前，锘海已服务国内多家知名药企并具备成功申报临床的案例。

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• 2023-01-31 15:29发布了行业资讯

  冻干技术在mRNA疫苗领域的突破性应用

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• 2023-01-28 09:50发布了行业资讯

  光声科普 | 光声信号原理及常见显影剂

  305人看过

• 2022-12-22 16:47发布了行业资讯

  锘海LS18平铺光片显微镜荣获2022年首届“金燧奖”中国光电仪器品牌榜银奖

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• 2022-12-15 16:24发布了行业资讯

  锘海诚挚邀请您参加第十三届华人生物学家协会2022双年会

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