pCMV-C-Flag是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端和Flag tag(Flag标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的3'端含有一个可以编码Flag标签的序列,因此可以表达出含有Flag标签的融合蛋白,可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-C-Flag质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
CMV promoter | 1-602 |
T3 promoter and T3 primer binding site | 620-639 |
multiple cloning site | 680-740 |
c-Flag tag | 741-764 |
T7 promoter and T7 primer binding site | 817-838 |
SV40 polyA signal | 850-1233 |
f1 origin of ss-DNA replication | 1371-1675 |
bla promoter | 1700-1824 |
SV40 promoter | 1844-2182 |
neomycin/kanamycin resistance ORF | 2217-3008 |
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 3009-3467 |
pUC origin | 3596-4263 |
pCMV-C-Flag质粒的图谱如下:
pCMV-C-Flag的多克隆位点的详细图谱如下:
XmaIPstI |
SacI Small BamHI HindIII |
651 | GAGCTCCACC | GCGGTGGCGG | CCGCTCTAGC | CCGGGCGGAT | CCAAGCTTCT |
| CTCGAGGTGG | CGCCACCGCC | GGCGAGATCG | GGCCCGCCTA | GGTTCGAAGA |
Flag |
EcoRI EcoRV SacI BglII XhoI XbaI | |
701 | GCAGGAATTC | GATATCGTCG | ACAGATCTCT | CGAGTCTAGA | |
|
| CGTCCTTAAG | CTATAGCAGC | TGTCTAGAGA | GCTCAGATCT | |
| |
|
D D D K ApaI |
751 | ATGACGACGA | | CCCGGTACCT | TAATTAATTA | AGGTACCAGG |
|
| TACTGCTGCT | | GGGCCATGGA | ATTAATTAAT | TCCATGGTCC |
pCMV-C-Flag中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-Flag)包括:
Afl II | Age I | Ahd I | Asc I | Bbs I | Bbv II | Blp I |
Bsg I | BsiW I | BsmB I | BspM II | BsrG I | BssH II | Bst1107 I |
BstE II | Ear I | Eco47 III | Eco72 I | EcoN I | Esp I | Fse I |
Nru I | PflM I | Pme I | Pml I | PpuM I | Psp1406 I | Sap I |
Sca I | Spe I |
|
pCMV-C-Flag中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-Flag once)包括:
Nde I | CA`TA,TG | 241 |
| Pvu I | CG,AT`CG | 851 |
SnaB I | TAC|GTA | 347 |
| Bcl I | T`GATC,A | 1005 |
Nhe I | G`CTAG,C | 598 |
| Mun I | C`AATT,G | 1098 |
Sac I | G,AGCT`C | 656 |
| Hpa I | GTT|AAC | 1111 |
Sac II | CC,GC`GG | 663 |
| Mlu I | A`CGCG,T | 1234 |
BstX I | CCAN,NNNN`NTGG | 664 |
| Dra III | CAC,NNN`GTG | 1464 |
Not I | GC`GGCC,GC | 669 |
| Sfi I | GGCCN,NNN`NGGCC | 2121 |
PspA I | C`CCGG,G | 681 |
| BseR I | GAGGAG 16/14 | 2164 |
Xma I | C`CCGG,G | 681 |
| Stu I | AGG|CCT | 2167 |
Srf I | GCCC|GGGC | 683 |
| Cla I | AT`CG,AT | 2186 |
Sma I | CCC|GGG | 683 |
| Kas I | G`GCGC,C | 2345 |
BamH I | G`GATC,C | 688 |
| Nar I | GG`CG,CC | 2346 |
HinD III | A`AGCT,T | 694 |
| Ehe I | GGC|GCC | 2347 |
Pst I | C,TGCA`G | 704 |
| Bbe I | G,GCGC`C | 2349 |
EcoR I | G`AATT,C | 706 |
| Msc I | TGG|CCA | 2428 |
EcoR V | GAT|ATC | 714 |
| Tth111 I | GACN`N,NGTC | 2464 |
Sal I | G`TCGA,C | 718 |
| BsrD I | GCAATG, 8 | 2579 |
Acc I | GT`MK,AC | 719 |
| Bsp1286 I | G,DGCH`C | 2649 |
Bgl II | A`GATC,T | 724 |
| Rsr II | CG`GWC,CG | 2862 |
PaeR7 I | C`TCGA,G | 730 |
| BsiC I | TT`CG,AA | 3028 |
Xho I | C`TCGA,G | 730 |
| BstB I | TT`CG,AA | 3028 |
Xba I | T`CTAG,A | 736 |
| Bsa I | GGTCTC 7/11 | 3335 |
Bsp120 I | G`GGCC,C | 769 |
| HgiE II | ACCNNNNNNGGT-1/13 | 3675 |
Apa I | G,GGCC`C | 773 |
| ApaL I | G`TGCA,C | 3950 |
pCMV-C-Flag质粒中对于插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
T3 primer(620-639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
T7 primer(817-838): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
pCMV-C-Flag的全序列信息: D2632 pCMV-C-Flag-seq.txt
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
D2632-1μg | pCMV-C-Flag | 1μg |
D2632-100μg | pCMV-C-Flag | 100μg |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或ZL,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。