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北京索莱宝 杀稻瘟菌素 S(Blasticidin S) B9300-10mg
  • 品牌:索莱宝
  • 规格型号: 10mg
  • CAS编号:
  • 产地:通州区
  • 样册:暂无
  • 供应商报价: ¥ 700
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详细介绍

产品浓度:10mg/ml

Selection antibiotic: cell culture tested, sterile reagent

作用机理:

Blasticidin S是一种来自Streptomyces griseochromogenes的核苷类抗生素,通过干扰核糖体中肽键的形成来特异性地YZ原核和真核生物的蛋白质合成。Blasticidin S用于筛选携带有bsr或BSD耐受基因的转染细胞。杀稻瘟菌素具有快速而的作用模式,很低的抗生素浓度便能导致细胞迅速死亡。

抗性基因:

目前已经克隆和测序的杀稻瘟菌素耐受基因有3种,一种是分离自产生菌Streptoverticillum sp.的乙酰基转移酶基因bls,另外两种是脱氨酶基因,包括从Bacillus cereus 中分离的bsr和从Aspergillus terreus 中分离的BSD 基因。Bsr和 BSD基因是最常用的筛选标志,用于哺乳动物和植物细胞的基因转移实验,也可用于E.Coli。

运输与保存方法

冰袋(wet ice)运输。收到产品后放到-20 ºC保存,有效期至少1年,避免反复冻融。

应用浓度:

1)Escherichia coli

E. coli对Blasticidin S的敏感性稍差,但是转化子对Blasticidin S具有耐受性,可以用低盐LB培养基(pH 8)进行筛选,浓度范围为50-100 μg/ml Blasticidin S。高pH值可以提高Blasticidin S的活性。

2)哺乳动物细胞

哺乳动物细胞中Blasticidin S的工作浓度范围在1-50 μg/ml。初次实验建议通过灭杀曲线来确定**使用浓度。

- 25-100 µg/ml in bacteria
- 1-30 µg/ml in mammalian cells

操作步骤(哺乳动物稳转株筛选):

Blasticidin S通常使用浓度为10 μg/ml。携带bsr或BSD基因的质粒转染到细胞中,在含有Blasticidin S的正常生长培养基中孵育,用于筛选稳定转染细胞株。

(1)转染后48h,用含有适宜浓度Blasticidin S的新鲜培养基将细胞传代(注:细胞处于活跃分裂期时抗生素工作**。细胞密度太高,抗生素效率降低。细胞分盘时覆盖率**不超过25%);

(2)每3-4天去除培养基,加入含抗生素的新鲜培养基;

(3)7天后检测细胞集落形成。根据宿主细胞种类和转染/筛选效率,集落形成可能需要增加一周或更久。

(4)转移5-10个耐受克隆到35mm细胞盘中,加入选择培养基维持培养7天。随后用细胞毒性实验进行检测。


主要用途
北京索莱宝 杀稻瘟菌素 S(Blasticidin S) B9300-10mg
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