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广州市百菱生物科技有限公司
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北京索莱宝 α-半乳糖苷酶活性检测试剂盒 BC2570
  • 品牌:索莱宝
  • 规格型号: 50管/24样
  • CAS编号:
  • 产地:通州区
  • 样册:暂无
  • 供应商报价: ¥ 750
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详细介绍
  • α-半乳糖苷酶(α-GAL)活性检测试剂盒说明书
    可见分光光度法
    注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。 货号:BC2570 规格:50T/24S 产品内容: 提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。 试剂一:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 5mL 双蒸水,充分溶解备用;用不完的试剂 仍-20℃保存。 试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。 试剂三:液体 80mL×1 瓶,4℃保存。 标准液:液体 1mL×1 支,4℃保存,5μmol/mL 对硝基苯酚溶液。 产品说明: α-GAL(EC3.2.1.22)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,能专一地催化α半乳糖苷键 的水解,主要参与棉子糖、水苏糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL 对于植物种 子的萌发至关重要,种子萌发初期,其催化产生的 D-半乳糖通过糖酵解途径迅速转化和消耗,为种 子的萌发提供最初的能量来源,后期则主要参与细胞壁储藏多糖水解。 α-GAL 分解对-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚,后者在 400nm 有最大吸收峰,通过 测定吸光值升高速率来计算α-GAL 活性。 试验中所需的仪器和试剂: 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 操作步骤: 一、粗酶液提取: 1、细菌或培养细胞的处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细 胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重​复 30 次),15000g, 4℃,离心 20 分钟,取上清,置冰上待测。 2、组织的处理:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;15000g,4℃,离心 20min,取 上清,置冰上待测。 3、标准液的处理:用蒸馏水将标准液稀释至 200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/mL. 
    充分混匀,室温静置 2min 后, 400nm 处测定吸光值 A。△A=A 测定管-A 对照管 α-GAL 活性计算: 根据标准管的吸光度(x:各标准管吸光值减去浓度为零的标准管的吸光值)和浓度(y,nmol/mL) 建立标准曲线,将△A 带入标准曲线中,计算样品生成的产物量(nmol/mL)。 (1)按样本蛋白浓度计算: 单位的定义:每 mg 组织蛋白每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 α-GAL 活力(nmol/h/mgprot)=(y×V 反总)÷(V 样×Cpr)÷T=20×y÷Cpr 需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。 (2)按样本鲜重计算: 单位的定义:每 g 组织每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 α-GAL 活力(nmol/h/g 鲜重)=(y×V 反总)÷(W×V 样÷V 样总)÷T=20×y÷W (3)按细菌或细胞数量计算: 单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 α-GAL 活力(nmol/h/104 cell)=(y×V 反总)÷(1000×V 样÷V 样总)÷T=0.02×y Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;V 反总:反应体系总体积,0.5mL;V 样:加入反应体系中样 本体积,0.05mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g; 1000:细胞或细菌总数, 1000 万;T:反应时间,0.5h。

主要用途
北京索莱宝 α-半乳糖苷酶活性检测试剂盒 BC2570
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