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阴离子交换色谱法对PCR产物(DNA)的分离和高纯度制备
发布:东曹(上海)生物科技有限公司浏览次数:424单分子分析技术和磁镊实验是用来研究核酸、蛋白质、酶反应以及生物分子的单分子水平的动态行为的常用方法。该方法中用到的核酸底物(DNA/RNA)必须是纯度非常高的样品。
在近期发表的一篇关于DNA高纯度制备的研究论文中,层析时使用了无孔阴离子交换填料的色谱柱TSKgel DNA-STAT对DNA(PCR产物等)进行快速分离纯化,来代替以往的分离纯化法。
(论文出自开放获取期刊Open Access)
01 TSKgel DNA-STAT色谱柱分离纯化DNA时的要点:
• 对PCR产物、寡核苷酸(结合有生物素等)连接的DNA底物进行分离、纯化。
• 在60~90分钟内完成对扩增后的PCR产物或DNA底物的分离、纯化。
• DNA样品的ZD载量是100μg。载量为20~50μg时的纯化纯度是95~100%,回收率是70~90%。
02 DNA(PCR产物)的分离示例
图1: 含有发卡和复制叉的1.2 kb insert DNA的结构
色谱柱对PCR产物(DNA)的吸附较强,盐梯度超过0.5 mol/L NaCl时,样品被洗脱。
图2: 洗脱峰5组分的电泳图
Ref.: Y. Lue and P. Bianco, J. Biological Methods, 2021, Vol. 8(1), e415, DOI:10.1440/jbm.2021.350
03 核酸分析用离子交换色谱柱的选择:
东曹生命科学提供的核酸分析专用离子交换色谱柱有TSKgel DNA-STAT (强阴离子交换填料) 和TSKgel DNA-NPR (弱阴离子交换填料) 。这两款色谱柱在填料的粒径、离子交换基团和柱尺寸上略有不同。
TSKgel DNA-NPR采用无孔亲水聚合物基质填料,对质粒DNA的三种立体异构体oc、sc/cc、linear可实现高分辨率分析。而TSKgel DNA-STAT在样品载量上更具有优势,如果考虑实验室级别的分离纯化,操作压力较低的TSKgel DNA-STAT则更适合。
2021-05-21 -
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