HILIC-UHPLC-MS法对单克隆抗体的糖基化分析

糖基化是蛋白质翻译后修饰的最常见的类型之一。多糖侧链（聚糖）在免疫细胞信号传导的生理、病理现象中起着重要作用。除了对糖蛋白的糖基化模式进行结构/功能上的分析外，糖基化的全面表征也是生物药物生产中的一个主要的质量参数。亲水相互作用色谱法（HILIC）一直以来都是公认的有效分离和定量游离聚糖的分析方法。

糖蛋白分析包括对N-糖链结构和O-糖链结构的表征。除质谱技术外，利用酰胺固定相的HILIC法高分辨率分离糖蛋白的N-聚糖，是许多实验室常用的一种成熟稳定的分析技术。通过2-AB或PA等荧光试剂标记聚糖，可以进行飞摩尔水平的糖的检测。

TSKgel Amide-80色谱柱的化学特性使其能够在单次色谱运行中分离中性聚糖和带电聚糖。将TSKgel Amide-80色谱柱上标记多糖的保留时间与标记葡聚糖同聚物梯度进行比较，可以识别聚糖结构，计算出聚糖的葡萄糖单元值（GU值）。对外切糖苷酶消化物进行分离后获得的GU值通过查询聚糖数据库（Glycobase，autoGU）预测聚糖结构。

多年来，3 μm与5 μm的TSKgel Amide-80色谱柱已经被许多QC实验室用来分析糖类物质。2 μm粒径的Amide-80色谱柱不仅具有相同的分离选择性，而且可以提高(U)HPLC和LC-MS分析的峰容量和灵敏度，可将HPLC分析方法顺利转移至UHPLC。

此款色谱柱特别适用于UHPLC系统，因为2 μm的小粒径有助于减少系统死体积、优化检测器灵敏度，可以获得更高分辨率的分离效果！

01 应用实例：采用TSKgel Amide-80(2μm)色谱柱对标记的聚糖进行糖基化分析（荧光检测）

02 应用实例：采用TSKgel Amide-80(2μm)色谱柱进行2-AB糖原UHPLC-MS分析