抗性淀粉检测试剂盒

前言
抗性淀粉（RS）是指在人小肠内不能被酶解的淀粉，在大肠部分或完全发酵。RS是总膳食纤维的组分之一。
原理（AOAC法 2002.02 ;AACC法32-40）
样品使用α-胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶（AMG）37℃振荡水浴孵育16小时，在这期间，通过两种酶的联合作用，非抗性淀粉被溶解，水解成D-葡萄糖，孵育结束后，加入等体积的乙醇或工业甲基化酒精（IMS,变性乙醇）终止反应。离心上述溶液，收集上清勿弃，底部残留絮状团即为样品中的RS，用含水的IMS或乙醇（50%v/v）洗涤絮状团，洗涤后离心，再重复一次洗涤离心，收集离心后获得的上清，与之前收集的上清混合。小心倒出试管残留的液体，将絮状团置于冰水浴中，加入2M KOH溶解，溶解的同时用磁力搅拌机剧烈搅拌。用醋酸盐缓冲液将这个溶液调至中性，用AMG将淀粉定量水解成葡萄糖。D-葡萄糖用葡糖氧化酶/过氧化物酶试剂（GOPOD）测定，这也是对样品中RS含量的测定。非抗性淀粉（可溶性淀粉）的测定可通过集中的上清液并定容至100mL，再用GOPOD测定D-葡萄糖完成。
应用性和精确性
这个方法需要样品中RS含量多于2% w/w。如RS含量多于2% w/w，常规标准误差为+5%。少于2% w/w RS的误差更高。
试剂盒
瓶子1：淀粉葡糖苷酶AMG，12 mL，3300U/ mL，条件为pH4.5，40℃下，底物为可溶性淀粉，[单位或为200U/mL，条件为pH4.5，40℃下，底物为对硝基苯基β-麦芽糖苷]。AMG溶液应完全没有可检测到的游离D-葡萄糖。4℃下稳定性> 3年。
瓶子2：α-胰淀粉酶(胰酶，10g，3Ceralpha U/mg)。4℃下稳定性> 3年。
瓶子3：GOPOD 试剂缓冲液。磷酸钾缓冲液（1M，pH7.4），对羟基苯甲酸（0.22M）和叠氮化钠（0.4%W/V）。4℃下稳定性> 3年。
瓶子4：GOPOD试剂酶。葡糖氧化酶（>12,000U）加上过氧化物酶（>650U）和4-氨基安替比林（80mg）。冻干粉，-20℃下稳定性>5年。
瓶子5：D-葡萄糖标准溶液（5 mL,1.0mg/mL）溶于苯甲酸0.2%（w/v）。室温下稳定性>5年。
瓶子6：抗性淀粉对照。抗性淀粉含量如表所示。室温下稳定性>5年。

酶及酶法试剂盒
爱尔兰Megazyme公司是全球知名的酶及酶法分析试剂盒的生产厂家，其中大多数产品都被AOAC(Association of Official Analytical Chemists)、AACC(American Association of Cereal Chemists)、ICC(International Association for Cereal Science and Technology)、 EBC(European Brewing Convention)、RACI(Royal Australian Chemical Institute)等国际组织采用。其中欧洲检测果汁及葡萄酒等发酵产品基本都采用该公司产 品。

其中全线产品及相关检测信息见：2009Megazyme产品目录.PDF。

该公司产品分以下系列：


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1. 生物及食品酶法分析试剂盒 (Diagnostic Kits)
2. 试剂混合物(Reagent Mixtures)
3. 协同因子(Cofactors)
4. 糖酶片剂试验(Carbohydrase Tablet Tests)
5. 蛋白酶片剂试验(Protease Test Tablets)
6. 可溶性呈色底物(Soluble Chromogenic Substrates)
7. 不可溶性（交联的）呈色底物(Insoluble (Crosslinked) Chromogenic Substrates)
8. 酶(Enzymes)
9. 植物凝血素(Lectins)
10. 多聚糖(Polysaccharides)
11. 低聚糖(Oligosaccharides)
12. 相关产品 (General)


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其中产品被国际机构采用，建立国际检测方法如下：


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总淀粉检测盒（Total Starch Assay Kit）
AOAC Method 996.11
AACC Method 76-13
ICC Standard Method no. 168
RACI Standard Method
总膳食纤维检测盒（Total Dietary Fibre Assay Kit）
AOAC Method 985.29
AOAC Method 991.42
AOAC Method 993.19
AOAC Method 991.43
AACC Method 32.07
AACC Method 32.21
AACC Method 32.05
淀粉损失检测盒（Starch Damage Assay Kit）
AACC Method 76-31
ICC Standard No. 164
RACI Standard Method
α-淀粉酶检测盒Ceralpha (α-Amylase) Assay Kit
AOAC Method 2002.01
ICC Standard No. 303
RACI Standard Method
CCFRA Flour Testing Working Group Method 0018
AACC - under evaluation.
Alpha淀粉酶检测盒Amylazyme (α-Amylase Assay)
AACC Method 22.05
RACI Standard Method
果聚糖检测盒Fructan Assay Kit
AOAC Method 999.03
AACC Method 32-32
木聚糖酶AX片剂（Xylazyme AX Tablets）
Xylazyme AX Tablets have been widely adopted in the fermentation and feeds industries for the measurement of Xylanase.
β-葡聚糖检测盒β-Glucan (Mixed Linkage) Assay Kit
AACC Method 32-23
EBC Methods 3.11.1, 4.16.1 and 8.11.1
AOAC Method 995.16
ICC Standard No. 166
RACI Standard Method
极限糊精酶和支链淀粉酶检测片剂（Limit-Dextrizyme）
RACI Standard Method
β-葡聚糖酶检测盒（β-Glucanase (Malt and Microbial) Assay Kit）
RACI Standard Method
β-淀粉酶检测盒（Betamyl (β-Amylase Assay Kit)）
RACI Standard Method.
木聚糖酶检测底物（Azo-Wheat Arabinoxylan ）
Azo-Wheat Arabinoxylan, Azo-CM-Cellulose and Ceralpha methods for the assay of Xylanase, cellulase and ?-Amylase, respectively, have been adopted by the UK silage industry.
抗性淀粉检测盒（Resistant Starch Assay Kit）
AOAC Method 2002.02