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大昌洋行(上海)有限公司(大昌华嘉科学仪器部)
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仪企号大昌华嘉科学仪器部
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技术文章
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Biochrom30+氨基酸分析仪氧化水解法检测鱼料中氨基酸
发布:大昌洋行(上海)有限公司(大昌华嘉科学仪器部)浏览次数:624一、样品前处理
1、所用试剂
1.1 浓盐酸,优级纯
1.2 6mol/L 盐酸:浓盐酸与水1:1混合
1.3 水:去离子水
1.4 苯酚:须重蒸
1.5 19种氨基酸标准品
2、标样配置
氨基酸混合标准储备液:含有天冬氨酸、苏氨酸等17种常见组成蛋白质的氨基酸。
牛磺酸标准储备液:用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用。
正亮氨酸标准储备液:用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用。
璜基丙氨酸标准储备液:用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用。
蛋氨酸砜标准储备液:用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用。
羟脯氨酸标准储备液:用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用。
鸟氨酸标准储备液:用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用。
将17种氨基酸混合标准储备液、牛磺酸、正亮氨酸、璜基丙氨酸、蛋氨酸砜、羟脯氨酸、鸟氨酸及PH2.2的柠檬酸缓冲液按照1:1:1:1:1:1:1:3配置成0.25umol/L的标准品待用。
3、前处理设备
1) 天平
2) 水解管
3) 量筒
4) 无油真空泵
5) 干浴水解、浓缩仪
6) 移液管
7) 0.45um滤膜
4、样品制备(参考欧盟饲料指令98/64/EC )
1)样品的准备
粉碎样品,通过0.5mm的筛孔。高水分的样品粉碎前必须低于50℃鼓风干燥或者冷冻干燥。高脂肪含量的样品粉碎前必须用轻质石油(3.12)脱脂。
2) 氧化
从准备好的样品中称取约0.1~1克样品,准确到0.2mg,于100 ml带螺纹盖子的瓶子中,称取的样品应该含有大约10mg氮,水分不能超过100mg。将瓶子放于冰水浴中冷却至0℃,加5ml氧化试剂(过甲酸苯酚),用带弯头的玻璃刮勺混合。用空气密封膜将瓶子和刮勺一起密封,密封后一起放入0℃冰箱的冰水浴中,放置16小时。之后,从冰箱中取出,加0.84克偏重亚硫酸钠(3.4)来分解过量的氧化试剂。
3)水解
加入25毫升盐酸-苯酚溶液, 然后将反应瓶放在烘箱中,温度控制在110摄氏度,旋松帽子(防止玻璃瓶子破裂),水解1小时。然后快速旋紧瓶塞(戴手套和护眼罩)将其继续在烘箱110摄氏度下水解23小时。
4)加入内标并且调节pH值到2.20
当水解反应结束后,将反应瓶从烘箱中取出,并且打开瓶口(戴手套和护目镜)。冷却后用定量加样器准确加入15.00克(15毫升)正亮氨酸标准溶液,混合并且转移水解溶液到250毫升的塑料烧杯中。加入大约125毫升柠檬酸缓冲液和19毫升氢氧化钠水溶液,将实验烧杯放入到样品容器中用氢氧化钠水溶液将溶液调节到pH为正好2.20。转移一部分溶液(不需要全部)到50毫升有盖子的塑料瓶中。可以马上测定或者放入冰箱等到分析的时候测定。
二、分析方法描述(Biochrom 30+)
氨基酸分析仪分析方法参数:
1) 色谱柱:Biochrom Na型阳离子交换树脂柱,4.6X20cm
2) 分离程序:
3) 运行时间:分析时间65min
4) 反应单元温度:135°C。
5) 检测波长:570nm、440nm同时检测。
附、鱼料分析图谱及做样结果
2020-04-25相关产品 -
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