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Biochrom30+ 氨基酸分析仪检测褐篮子鱼中水解氨基酸

发布:大昌洋行(上海)有限公司(大昌华嘉科学仪器部)
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摘要:

以褐篮子鱼为原料,使用Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明褐篮子鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比为17770.7mg/100g,必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的39.37%,鲜味氨基酸占氨基酸总量的39.27%。

 

一、样品前处理

1、所用试剂

1.1  浓盐酸,浓度≥36%,优级纯

1.2  6mol/L 盐酸:取500mL 盐酸加水稀释至1000mL,混匀。

1.3  水:去离子水

1.4  苯酚:须重蒸

1.5  17种氨基酸标准品

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2、前处理设备

1)  析天平:感量分别为 0.0001g和0.00001g。

2)  水解管:耐压螺盖玻璃试管,体积为25mL

3)  匀浆机。

4)  无油真空泵

5)  干浴水解浓缩仪

6)  移液管

7)  0.22um滤膜


3、样品制备(参考国标GB 5009.124-2016)

原料鱼手工去除鱼鳞、鱼皮、鱼刺和内脏,采肉后清洗、沥干,在匀浆机中打成肉糜,于-18℃冰箱中冷冻保存,分析时取出解冻后使用。


4、试样水解

称取含蛋白7.5-25mg的试样,加入水解管中,加入15mL 6mol/L盐酸,继续向水解管内加入苯酚3滴~4滴。冷冻3min~5min,接到真空泵的抽气管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮气,重复抽真空-充入氮气3次后,在充氮气状态下拧紧螺盖。将水解管放入干浴水解浓缩仪中,110°C水解22-24h,冷却、混匀、开管、转移并定容到50ml容量瓶中,用移液管取适量样液,在干浴水解浓缩仪中50°C吹干,必要时加入少许水,重复吹干1-2次,加入3-5mL PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲液溶解,振荡混匀后,吸取溶液通过0.22μm 滤膜后,转移至仪器进样瓶,为样品测定液,供仪器测定用。


二、分析方法描述(Biochrom 30+)

氨基酸分析仪分析方法参数:

1) 色谱柱:Biochrom Na型阳离子交换树脂柱,4.6x20cm

2) 分离程序:

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3)  运行时间:经分析时间+再生时间 57min

4)  反应单元温度:135°C。

5)  检测波长:570nm、440nm同时检测。


三、样品中氨基酸含量的计算

样品测定液氨基酸的含量按式(2)计算:

ci = cs /As ×Ai ……………………(2)式中:

ci ———样品测定液氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

Ai ———试样测定液氨基酸i的峰面积;

As ———氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;

cs ———氨基酸标准工作液氨基酸s的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)。


试样中各氨基酸的含量按式(3)计算:

Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×109) ×100 …………(3)式中:

Xi ———试样中氨基酸i的含量,单位为克每百克(g/100g);

ci ———试样测定液中氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

F ———稀释倍数;

V ———试样水解液转移定容的体积,单位为毫升(mL);

M ———氨基酸i的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol);

m ———称样量,单位为克(g);

109 ———将试样含量由纳克(ng)折算成克(g)的系数;

100 ———换算系数。


附、褐篮子鱼分析图谱及做样结果

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全自动氨基酸分析仪

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2021-01-13
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