抗体亲和层析之His标签蛋白纯化填料大练兵

亲和层析是一种常用的纯化方法，通过构建重组蛋白、融合亲和标签的方法可以有效地确保不同目的蛋白通过相同的亲和标签使用相同的层析介质进行纯化。其中最常用的就是His (组氨酸)标签，利用组氨酸残基侧链与金属离子的强烈作用，可以在一步纯化中得到较高纯度的His标签蛋白样品。

表1: His标签的特点

Cytiva专为His标签蛋白纯化提供多种解决方案，填料种类繁多，包括预螯合金属离子的 Ni Sepharose 6 Fast Flow (FF) (17531802)、Ni Sepharose High Performance (HP) (17526802)、Ni Sepharose excel (17371202) 和 TALON Superflow (28957502)，也包括可用于金属离子螯合的 IMAC(17092007) 和 Chelating (17057501) 系列填料。

Ni Sepharose 6 Fast Flow (FF)

Ni Sepharose 6 Fast Flow (FF) (17531802) 由90μm的高度交联琼脂糖珠组成，其上已经螯合了Ni²⁺离子。这款填料具有高载量、良好的兼容性、流速快、易放大等特点，是组氨酸标签手动纯化的常规选择。

Ni Sepharose High Performance (HP)

Ni Sepharose High Performance (17526802) 由高度交联的6%琼脂糖珠 (34μm)组成，并带有螯合基团Ni²⁺离子。因其具有更小的粒径，所以使用HP填料，分辨率更高，峰展宽更窄，样品的纯度、浓度也会相对地得到提高。

TALON Superflow

比起Ni填料，其他不同的金属离子也是可以选择的，TALON填料就是其中一种。

TALON Superflow (28957502)  由90μm高度交联的琼脂糖珠和螯合了Co²⁺离子的基团组成，该填料与组氨酸高选择性结合，并对杂蛋白质的亲和力降低，因此可以达到较高的His-Tag蛋白纯度。

IMAC & Chelating系列填料

IMAC & Chelating系列填料都属于未耦合金属离子的填料，且两者的配位方式不同。以Ni²⁺离子为例，Chelating (17057501) 采用的是IDA的配位方式，Ni²⁺离子可形成6个配位键，其中与基架配基形成3个配位键，剩余3个用于捕获蛋白；而 IMAC (17092007) 则是4个配位键与配基螯合，因此Ni²⁺离子稳定性更好。两者因螯合方式不同，Ni²⁺离子结合力也存在细微差距，在对不同蛋白的纯化过程中表现出不同的选择性。

Ni Sepharose excel

相比常规填料，Cytiva始终在蛋白纯化领域中不断开拓创新，提升产品品质，Ni Sepharose excel填料尤其贴合使用者的需求。

Ni Sepharose excel (17371202) 由90μm高度交联的琼脂糖珠组成，其上已经结合了螯合配体Ni²⁺离子。这款填料与Ni²⁺离子有极强的结合力，打破了常规Ni填料的局限，能够耐受100mM的EDTA，大大扩展了缓冲液的兼容性，从而省去了置换缓冲液的操作步骤。

Ni Sepharose excel具有更高的耐碱性，可耐受1M 的NaOH，从此彻底清洗Ni填料不再需要先脱镍步骤，直接使用NaOH就可以彻底清洗，避免交叉污染，节省时间也提高了效率。

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