标签蛋白纯化填料大练兵 | 第二篇

对于重组标签蛋白，亲和层析是一种常用的纯化方法，通过构建重组蛋白、融合亲和标签的方法可以有效地确保不同目的蛋白通过相同的亲和标签使用相同的层析介质进行纯化。

其中最常用的就是His (组氨酸)标签，上一篇文章已经介绍过 (详情见His标签蛋白纯化填料大练兵)。今天就为大家带来Cytiva针对GST-tag、 Strep (II)-tag、MBP-tag蛋白纯化的相应填料。

各种蛋白标签，自带属性与功能也不一致。例如：GST-tag与MBP-tag，可以促进蛋白的溶解度；而Strep-tag常应用于更高纯度的蛋白分离，例如膜蛋白纯化。

1. GST-tag蛋白填料

具较高载量特点的 Glutathione Sepharose 4B (17075605) 适合于高浓度样品；具有高流速特性的 Glutathione Seharose 4 FF (17513201) 适合于目标分子的快速捕获；具有更高分辨率特性的 Glutathione Sepharose HP (17527901) 适合于高纯度蛋白的分离。

2. Strep-tag蛋白填料

具有高载量特性的 Strep-Taction XT Sepharose (29401324) 适合于纯化Strep (II)或双Strep (II)标签蛋白；具有高分辨率特性的 Strep-Tactin Sepharose (28935599) 适合于纯化Strep (II)标签蛋白。

3. MBP-tag蛋白填料

Dextrin Sepharose HP (28935597) 适合于纯化MBP标签蛋白。

4. 双标签蛋白填料

双标签蛋白纯化指目标蛋白的N-或C-端分别连接某种特定的标签序列，通过进行一种以上的亲和层析纯化达到理想的纯度要求。

无论是标签蛋白还是双标签蛋白，Cytiva都拥有快速解决方案。同时针对不同的样品，Cytiva又将相应的产品细分化，更好地为每一个蛋白纯化过程助力。

文献分享

Expression of Melittin in Fusion with GST in E. coli and Its Purification as a Pure Peptide with Good Bacteriostatiic Efficacyol (IF=3.792)

蜂胶与GST融合在大肠杆菌中表达及纯化及抑菌作用 (IF=3.792)

材料与方法 

 1  构建表达载体：利用表达载体pGEX-6p-1构建得到表达载体pGEX-MET和pGEX-proMET。

 2  将质粒转化到E.coli BL21 (DE3)细胞中并添加IPTG诱导蛋白表达，裂解细胞后收集蛋白。

 3  离心收集细胞，裂解破碎后取上清作为样品，样品的浓度使用SDS-PAGE测定。

 4  通过 Glutathtione Sepharose HP (17527901)，获得GST-MET。

 5  将GST-MET与PPase混合孵育后，使用 SuperdexPeptide 10/300GL (28990944)，对样品进行提纯。

 6  选择E. coli、B. pumilus和S. pasteuri在96孔板中培养，菌落数计数，测定抗菌活力。

结论 

 1  采用Glutathione Spharose HP和Superdex Peptide 10/300GL组合，得到的样品纯度超过90%。

 2  rMET对革兰氏阳性短小杆菌和巴斯德氏杆菌的抑菌活性与cMET基本相同。

 3  该研究也为活性肽的生物制备提供了一个很好的范例。

Fig. 1.Superdex 10/300GL层析纯化图谱

Fig. 2.Superdex peptide 10/300层析纯化组分的SDS-PAGE图

Fig. 3.层析纯化图谱peak 2中rMET与cMET的SDS-PAGE图