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Cytiva（思拓凡）
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详细介绍
技术服务详细描述
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| 问题 | 可能原因 | 解决方法 | 推荐 |
| 无信号 | 一抗和二抗不匹配 | 二抗需和一抗宿主的物种相同（如一抗来自兔，二抗为抗兔抗体）。 | 抗体查询点击此处 |
| 没有足够的一抗或二抗结合目标蛋白 | 使用高浓度抗体，延长4℃孵育时间（如过夜）。 | 抗体查询点击此处 | |
| 封闭剂与一抗或二抗有交叉反应 | 使用温和的去污剂如吐温-20，或更换封闭剂（常用的脱脂奶粉、BSA、血清或明胶）。 | 封闭剂查询点击此处 | |
| 一抗不识别检测物种的蛋白 | 参照说明书，比对免疫原序列和蛋白序列以确保抗体和目的蛋白会发生反应，设置阳性对照。 | 抗体查询点击此处 | |
| 转膜不充分 | 使用可逆染色剂例如丽春红S检测转膜效果，检查转膜操作是否正确。PVDF膜需预先浸在甲醇中，然后浸到转移缓冲液中。 | 转膜查询点击此处 | |
| 洗膜过度 | 勿过度洗膜。 | 转膜查询点击此处 | |
| 过度封闭使目标蛋白不能显色 | 代替5%脱脂奶粉，使用含0.5%脱脂奶粉或无脱脂奶粉的抗体稀释液，或更换封闭剂，减少封闭时间。 | 封闭剂查询点击此处 | |
| 一抗失效 | 使用新鲜一抗，重复使用有效浓度会降低。 | 抗体查询点击此处 | |
| 二抗受叠氮钠YZ | 避免叠氮钠和HRP标记抗体一起使用。 | 抗体查询点击此处 | |
| 检测试剂盒过期和底物失活 | 使用新鲜的底物。 | 检测试剂查询点击此处 | |
| 背景高 | 未进行非特异性封闭或封闭不充分 | 延长封闭时间，考虑更换合适的封闭剂。推荐使用5%脱脂奶粉、3%BSA或血清封闭30分钟。这些可以包含在抗体缓冲液中。 | 封闭剂查询点击此处 |
| 一抗浓度过高 | 稀释抗体至合适浓度，以更高稀释度抗体孵育更长时间。 | 抗体查询点击此处 | |
| 抗体孵育温度过高 | 4℃孵育。 | 抗体查询点击此处 | |
| 二抗与封闭剂非特异性结合或反应 | 设置二抗对照（不加一抗）。 | 抗体查询点击此处 | |
| 一抗或二抗与封闭剂有交叉反应 | 在孵育和洗涤液中加入温和去污剂如吐温-20。脱脂奶粉含有酪蛋白，该蛋白本身就是一种***酸化蛋白，会结合***酸化特异性抗体而易产生高背景。使用BSA代替奶粉作为封闭剂。 | 抗体查询点击此处 | |
| 未结合蛋白质洗涤不充分 | 增加洗涤次数。 | 转膜查询点击此处 | |
| 膜的选择导致的高背景 | NC膜比PVDF膜背景低。 | NC膜查询点击此处 | |
| 膜干燥 | 在孵育过程中防止膜变干，在任何步骤都保证膜有充分的反应液，放入搅拌子不断搅动或轻轻震荡使膜浸在溶液中。 | 转膜查询点击此处 | |
| “微笑”条带 | 迁移过快；电泳温度过高（改变了PH值和迁移速度） | 降低迁移速度或低温电泳（冰库或冰上） | 电泳试剂查询点击此处 |
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