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紫外趣谈| 超微量技术如何测定核酸

发布：梅特勒托利多科技（中国）有限公司

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超微量技术如何测定核酸？

* 图源来源于网络

2020年还剩一个多月，今年大部分人的生活都因为新冠病毒疫情受到影响。想完全恢复过去的情况短期内应该不太可能，钟南山院士也表示，今冬明春这个疫情不会消失，或者冬天到春天的时候疫情会反扑，都有这个可能。

知识卡片

什么是新型冠状病毒？

2019新型冠状病毒(2019-nCoV)属于冠状病毒，而冠状病毒是一个大型病毒家族，直径约80～120nm，呈球形或椭圆形，具有多形性，是目前已知RNA病毒中基因组ZD的病毒。该病毒引起的感染主要发生在冬季和早春，引起的人类疾病主要是呼吸系统感染。

核酸的浓度和纯度

新冠疫情的爆发使得YL器械领域和生命科学领域获得广泛关注和重视。2019新型冠状病毒本质上是一种RNA病毒，那么可以采取紫外可见分光光度法测定核酸的浓度和纯度。

紫外可见分光光度法是能够根据260和280nm处的吸光度值确定核酸纯度和浓度的shou选技术。核酸在260nm处显示ZD吸光度，而蛋白质的ZD吸光度在280nm处。

核苷酸组分的吸光度

DNA吸收光谱实际上是单个核苷酸吸光度的总和。双环嘌呤如腺嘌呤和鸟嘌呤有着较高的吸光度，因此吸光系数要比单环嘧啶如胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶的高。

*单个核苷酸碱基A,T,G,C的吸光度

纯度检查

分离核酸后，尽管使用了额外的苯酚蛋白质提取，但仍可能残留微量蛋白质。因此必须检查核酸的纯度。可以通过确定在260nm和280nm处测得的吸光度的商来评估核酸纯度，比值A260/A280在1.9至2.1之间。

通常测定以下波长吸光度值可以很方便的检测核苷酸的纯度。

波长	污染物
A260/A280	蛋白质在280nm有ZD吸收，该比值用来检测蛋白质的污染物。下面的比值表征是比较纯的样品： DNA: ≥1.8 RNA: ≥1.9 较低的比值表明有蛋白质污染物。即使是对于纯样品，其比值也是因样品不同而不同，这取决于核苷酸的成分。
A260/230	苯酚、尿素、EDTA、含有肽键或芳族化合物的分子在230 nm有吸收。比值在1.8~2.2间表明是纯的核苷酸样品。
A320–A340	有时在脏比色皿上会检测到一些粒子吸收，而实际上该处核苷酸是没有吸收的。因此在320~340 nm之间的波长常被用作背景扣除。

超微量测量核酸

在生命科学领域中，核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量样本量很小，所以可以使用超微量平台通过紫外可见分光光度法进行DNA和RNA分析，减少此类贵重样品的需要量。使用短光程时，可以在无需稀释状态条件下测量生物样品。这样可以保存样品并将样品回收用于紫外可见分光光度法测量。

*UV5Nano超微量紫外可见分光光度计

UV5Nano超微量紫外可见分光光度计有效优化了分光光度计在生命科学领域的工作流程，结合了超微量测量与比色皿测量，通过预设的梅特勒-托利多生命科学方法可快速分析实验结果。

2020-11-30