-
产品文章
-
如何GX复苏细胞?这四点要注意!
发布:深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司浏览次数:1405每次复苏细胞都手忙脚乱?好不容易复苏的细胞竟然污染了?
今天教你如何有条不紊地GX复苏细胞!
细胞复苏流程
1、从液氮罐中取出冻存细胞,放入37℃水浴锅中融化,轻柔离心后收集细胞沉淀;
2、缓慢用移液枪吸去上清,加入适量浓度和体积的完全培养基,重悬细胞沉淀,转移至细胞培养皿或细胞培养瓶;
3、根据细胞培养皿或者培养瓶的体积,补足完全培养基,放入二氧化碳培养箱中培养观察。
操作中的注意事项
(一)、小心取出冻存管
许多小型液氮罐的设计是将细胞冻存在带盖的提篮中,提篮会浸没在液氮中。由于提篮中没有孔格的划分,细胞冻存管无法摆放整齐。取用细胞时候,实验人员经常需要逐一查看,寻找计划复苏的细胞。此过程耗时过久,可能会导致其他冻存管内的细胞受损。
一般大型液氮罐会配置成列的冻存架和细胞存储盒,取出冻存架和放回都需要平稳小心处理,避免带出大量液氮。罐内液氮较多时,可适当在罐口附近停留,等大部分液氮回流后再拎出。
注意
l 液氮在室温下会快速气化吸热,溅到皮肤或者眼睛上会烫伤。从液氮罐中取细胞时,需要做好防护工作——戴好厚手套和护目镜。
l 不要将冻存管丢入液氮罐,以防液氮溅出。
(二)、快速融化待复苏细胞
当找到准备复苏的冻存管后,不要着急放入水浴锅,先检查封口膜是否完整,如果贴了医用胶布,胶布是否有破损?因为一旦冻存管中有液氮流入,直接放入水浴锅中,管内压力骤升,可能导致冻存管炸裂,危及实验人员。
复苏细胞的核心技术,简而言之就是快融。从液氮罐中取出的细胞,需及时放入37℃水浴锅,进行快速融化,期间需不停地轻柔摇晃冻存管。在两分钟内完全融化细胞。出于卫生考虑,有些细胞房没有水浴锅,所以很多复苏操作,需要在不同实验室进行。如果两个实验室距离较远,且实验室室温较高,可提前准备一只干净的烧杯,装入37℃的水作中间缓冲。
注意
· 融化中不要让水浴锅中的水,流入冻存管中造成污染。
· 复苏过程中要格外注重无菌操作,经水浴锅融化后,需对冻存管消毒。同时更换手套和口罩,全程避免移液器接触管口及管壁。可以将冻存管放入无菌一次性PE手套中,再放入水中融化,避免污染也方便操作。
(三)、轻柔收集已复苏细胞
收集细胞前,要将所用培养基提前配制预热并摆放整齐,避免现用现配耽误复苏进程,让刚复苏的细胞及时接触正常的生长环境。若冻存液中存在DMSO,请根据所用细胞对其敏感的程度,判断要不要离心弃除。
刚复苏的细胞状态比较脆弱,应避免多次吹打和离心。比如原代细胞在复苏融化后,尽量不要进行离心操作,直接补足培养基,使细胞分散均匀,等3-6小时,细胞贴壁后,进行换液处理。此方式也适用于其他冻存状态一般的细胞。
(四)、培养前,计数&活力检测
复苏过程中,细胞计数必不可少。原则上,冻存前和复苏后,都需要对细胞进行计数和活率分析,判别冻存的效果和细胞复苏后的状态。
2018年9月,美国药典(USP-NF)出台了关于细胞冻存相关政策并明确指出,台盼蓝不能很好地识别刚复苏的细胞(细胞的种类和台盼蓝的浓度不同,对染色结果都有较大的影响),建议使用两种以上的方法进行细胞计数,如结合荧光染色计数法。
瑞沃德C100自动细胞计数仪
内置双通道荧光柱(红绿,红蓝,绿蓝),可叠加两种荧光结果,完成复杂的细胞样品分析,AO/PI染色,一键计数便知结果。让操作更简易,计数更JZ图片
2020-12-30相关仪器 -
免责声明
①本网刊载上述内容,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任
②若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi
-
仪网通金牌会员 第 5 年
深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司
认证:工商信息已核实
- 产品分类
- 品牌分类
- (深圳)瑞沃德
- (海淀区)北京软隆
- (美国)美国STARR
- (西班牙)西班牙Panlab
- (加拿大)加拿大FISO
- (美国)美国iworx
- (日本)Eicom
- (以色列)以色列AMPI
- (美国)美国AM Systems
- (美国)美国Lafayette
- (法国)法国BIOSEB
- (美国)美国MouseSpecifics
- (意大利)意大利Ugo Basile
- (德国)德国FST
- (韩国)CELLGENTEK
- (美国)KDS
-
仪企号深圳市瑞沃德生命科技有限公司
-
友情链接
-
手机版开启全新的世界m.yiqi.com/zt3036/