卒中术后脑组织病理学评估 - TTC染色

本文节选自《实验卒中手术学》主编：杨国源

书号：ISBN 978-7-5046-6264-4/R·1648

氯化三苯基四氮唑（TTC）染色

       氯化三苯基四氮唑TTC（2，3，5-triphenyltetrazolium chloride）染色是一种定量检测脑梗塞体积的迅速、方便、便宜、可靠的方法，它是一种用于评价组织内脱氢酶活性的标准染色方法。大脑切成2毫米的切片后，放入2%TTC溶液中，TTC能与正常线粒体氧化酶系统发生反应而降解成深红色，而梗塞部位受损以致线粒体缺乏降解TTC的酶的能力而不会被TTC染色，呈现白色，使得受损组织与正常组织极易区分开来。

       目前，很多学者釆用TTC染色标记脑组织缺血性损伤，计算脑梗死灶体积。该方法能清楚地区分正常脑组织和梗死脑组织的界线，但要求实验者在取材时要速度快，在极短时间内将组织投入TTC溶液中。组织中断血供时间过长，会造成新的损伤区域，致使测量出现较大误差，甚至组织完全不能染色。剥离和切片时应十分注意。因为脑组织十分脆软，容易出现碎裂，给测量带来不便（如下图所示）。

MCAO术后TTC染色

白色为梗塞部位；深红色为正常部位

一、实验材料

       1.TTC溶液。

       2.磷酸盐缓冲液。

       3.刀片。

       4.大脑模具。

       5.培养皿。

       6.载玻片。

       7.4%多聚甲醛。

二、TTC染色过程

       1.动物处死后，取脑并且小心地浸入低温磷酸盐缓冲液中。这样使大脑更加坚硬，方便切片。

       2.用刀片把大脑切成2毫米厚片。

       3.切片时要小心，因为脑组织容易粘在刀片上。为了防止损伤，刀片先浸入2%TTC溶液中。TTC溶液对光和热敏感，在不使用的时候要用铝箔包好。切好的脑片放入TTC溶液中进行染色并且持续观察颜色的改变。可以加热使这个过程变快，比如放入37℃的培养箱。

       4.当脑片表面开始变成粉红色，翻转脑片。染上色的是具有活性的脑组织。梗塞的部分由于线粒体失活，所以不能被染色，仍然为白色。

       5.当脑片变成红色，反应结束，用磷酸盐缓冲液洗去TTC溶液。

       6.脑片要进行拍照，来确定梗塞量。也可以把脑片放入多聚甲醛中过夜进行固定。这样拍照更加方便。此步一定要注意避光，否则染色还会褪色。

三、应用TTC检测的注意点

       1.TTC染色是计算梗塞量的标准方法。

       2.TTC溶液对光敏感，因此要避光保存。

       3.染色前是否进行磷酸盐缓冲液灌注不影响实验的结果。

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