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深圳市瑞沃德生命科技有限公司
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技术干货 | 细胞培养器材如何清洗灭菌

发布:深圳市瑞沃德生命科技有限公司
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shuā!Píng!La!

是什么声音让实验室小伙伴闻风丧胆?

是什么原因让你对师姐师兄的问候已读不回?

究竟是人性的扭曲还是道德的沦丧?

让我们走进“刷瓶廉价劳动力”的内心世界!


开学也一段时间了,大家的细胞都复苏起来了吧,都扩大培养了吗?培养瓶和培养皿的库存是不是要见底了?有没有发现这几天师兄师姐面对你的态度异常暧昧?然后假装不好意思地说:“师弟师妹,周三下午没安排吧?我们刷下细胞瓶吧!”。


此时你眼中的师兄师姐:

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师兄师姐一抬头看见的你:

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只有刚刚进实验室的研一小可爱和刚来实习的本科生,留在原地弱弱地问:“这个要怎么刷呀?”“不难的,刚才跑的师兄和师姐是专家,你去问问,然后让他们安排一下”。


就这样,被安排的各位师弟师妹开始了几天劳作。


为什么需要刷瓶?

在体外实验中,细胞对任何有害物质都非常敏感。无论是病原微生物、培养液中杂质、细胞残留及非营养成分的化学物质等,均能影响培养细胞的生长。因此对新使用玻璃器皿和重新使用的培养器皿都要严格彻底的清洗。


而细胞培养瓶、培养皿和移液管,是细胞培养过程中消耗量较大的耗材。这三种耗材都分别有不同的材质,实验室最常用的是玻璃材质和聚苯乙烯的塑料材质,根据不同细胞对贴壁的需求,部分实验室可能仍在使用玻璃材质的细胞培养瓶等耗材。为了保证培养瓶和培养皿有足够库存,因此需要定期清洗。


如何清洗玻璃细胞培养耗材

一般玻璃器皿的清洗包括浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤,使用前要进行灭菌处理。清洗后的玻璃器皿不仅要求视觉上看起来干净,而且不能在培养表面残留任何物质。


01

浸 泡

初次使用和培养使用后的玻璃器皿,均需用清水浸泡,以使附着物软化或被溶液掉。


初次使用的玻璃器皿,在生产及运输过程中,玻璃表面带有灰尘,且玻璃表面常呈碱性及带有一些对细胞有害的物质等。使用前应先用流水简单刷洗,然后用稀盐酸液浸泡过夜,以中和其中的碱性物质。


培养过细胞后的细胞瓶等,则常附有大量蛋白质和残存的细胞、碎片等,干后不易洗掉,故用后要完全浸入水中,避免留有气泡或浮在液面上。


02

刷 洗

浸泡后的玻璃器皿,一般要用软毛刷配合洗涤剂刷洗,以除去器皿表面附着较牢的杂质。工具不要太硬,刷洗要适度,过度会损害器皿表面光泽度,表面出现划痕后,会影响细胞贴壁生长,同时更容易破损。


03

浸 酸

酸液是由重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水按一定比例配制而成,酸液对玻璃器皿腐蚀作用轻微,但是长时间浸泡的细胞瓶会变脆,而其强氧化作用可除掉刷洗不掉的微量杂质。


浸酸是清洗过程中关键的一环。在接触酸液之前必须做好防护,准备过肘的耐酸手套、相关面部和身体的防护器具及工作服等。浸泡时要小心轻放,切忌直接将培养耗材直接丢入酸缸中,尤其是非全开放瓶口的器皿,在酸液流入瓶/管内会产生大量气泡,防止气泡产生破裂后,酸液小液滴迸溅,同时器皿要充满清洁液,勿留气泡或器皿露出清洁液面。浸泡时间一般为过夜,不应少于6 小时。  


Tips:酸液配置,可根据需要,配制成不同的强度,常用的下列三种: 

重铬酸钾(g)浓硫酸(ml) 蒸馏水(ml) 

(A)强酸液 63∶1000∶200000 

(B)次强酸液 120∶200∶1000 

(C)弱酸液 100∶100∶100

配制时应注意安全,酸缸容器应该选用耐强酸腐蚀等材质,且厚度要达标,配制酸液过程中,须穿戴耐酸手套和围裙,戴好防护镜、保护好面部及其他身体裸露部分。配制过程中可使重铬酸钾溶于水中,然后慢慢加浓硫酸。并不停的用玻璃棒搅拌,使产生的热量挥发,配好的新酸液一般为红棕的砖色,根据配制后的使用次数,酸液的氧化性和效果会逐渐减弱,且颜色逐渐变为墨绿色。


04

冲 洗


在浸酸后,将玻璃耗材捞出,尽可能沥干容器内的酸液,避免迸溅。先用自来水冲洗3-5次,然后用蒸馏水冲洗3-5次,最后用去离子水冲洗3-5次,以保证器皿内无酸液残留,晾干或烘干备用。有条件的实验室可使用超纯水再次冲洗。


虽然器皿中残留的酸液很少,但是对冲洗后的废水处理,仍然要格外注意,如果量少可以存至废液桶统一处理,如果量大要根据实际情况判定,能否直接将废液排入下水道。


05

灭 菌


为了避免有水蒸气进入培养器皿中,一般选择干热方式灭菌。将已烘干的培养瓶/皿和移液管进行封口处理,使用双层锡纸等材料包裹瓶口,移液管尾以脱脂棉填充后,过酒精灯快速灼烧。包装封口过程中,避免使用纱布等易产生碎屑和纤维的材料,防止落入耗材中影响细胞培养,也避免使用胶带等不耐高温的材料,防止融化后不宜清理或导致起火。


待干热灭菌箱降到室温后,将处理好的培养耗材小心带至细胞房中照射紫外,进行表面消毒即可使用,记得在开封后使用无菌PBS进行润洗。


听完上述清洗步骤,师弟就要拔腿开溜,师兄悲泣地说:“没用的,就算你跑到天涯海角,不刷瓶也没法做实验,谁让我们实验室没有阿姨呢,楼下实验室阿姨连移液器吸头都给他们装好了~”并留下两滴贫穷的柠檬泪。


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师兄我不跑,我给你看个塑料耗材的传单…”


“打住,塑料耗材质量不稳定还那么贵,小心老板觉得你想偷懒。”


“哪有?AlphaCell 细胞培养耗材,多种规格可选,伽玛射线消毒灭菌 ,无DNase、RNase、无热原无内毒素,亲水表面处理。最主要是质量有保证,价格公道合理,换算下来也没有贵很多,而且还安全,又硫酸又重铬酸钾的,这酸液溅到脸上,我不是破了相了吗?”


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“行吧,你给我找一件被酸烧破洞的实验服,我一会去找老板谈一下,那这周的怎么办?细胞房里弹尽粮绝了。”


“我昨天问了,现货供应,我们下周找时间再处理这些吧,我先去做实验啦!”


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想摆脱刷瓶的繁重劳动?想获得身体及心灵的自由?AlphaCell 细胞培养耗材值得拥有!不刷瓶,现货供应,随时开展实验!


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2020-10-26
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