技术干货 | 细胞培养器材如何清洗灭菌

shuā！Píng！La！

是什么声音让实验室小伙伴闻风丧胆？

是什么原因让你对师姐师兄的问候已读不回？

究竟是人性的扭曲还是道德的沦丧？

让我们走进“刷瓶廉价劳动力”的内心世界！

开学也一段时间了，大家的细胞都复苏起来了吧，都扩大培养了吗？培养瓶和培养皿的库存是不是要见底了？有没有发现这几天师兄师姐面对你的态度异常暧昧？然后假装不好意思地说：“师弟师妹，周三下午没安排吧？我们刷下细胞瓶吧！”。

此时你眼中的师兄师姐：

师兄师姐一抬头看见的你：

只有刚刚进实验室的研一小可爱和刚来实习的本科生，留在原地弱弱地问：“这个要怎么刷呀？”“不难的，刚才跑的师兄和师姐是专家，你去问问，然后让他们安排一下”。

就这样，被安排的各位师弟师妹开始了几天劳作。

为什么需要刷瓶？

在体外实验中，细胞对任何有害物质都非常敏感。无论是病原微生物、培养液中杂质、细胞残留及非营养成分的化学物质等，均能影响培养细胞的生长。因此对新使用玻璃器皿和重新使用的培养器皿都要严格彻底的清洗。

而细胞培养瓶、培养皿和移液管，是细胞培养过程中消耗量较大的耗材。这三种耗材都分别有不同的材质，实验室最常用的是玻璃材质和聚苯乙烯的塑料材质，根据不同细胞对贴壁的需求，部分实验室可能仍在使用玻璃材质的细胞培养瓶等耗材。为了保证培养瓶和培养皿有足够库存，因此需要定期清洗。

如何清洗玻璃细胞培养耗材

一般玻璃器皿的清洗包括浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤，使用前要进行灭菌处理。清洗后的玻璃器皿不仅要求视觉上看起来干净，而且不能在培养表面残留任何物质。

01

浸 泡

初次使用和培养使用后的玻璃器皿，均需用清水浸泡，以使附着物软化或被溶液掉。

初次使用的玻璃器皿，在生产及运输过程中，玻璃表面带有灰尘，且玻璃表面常呈碱性及带有一些对细胞有害的物质等。使用前应先用流水简单刷洗，然后用稀盐酸液浸泡过夜，以中和其中的碱性物质。

培养过细胞后的细胞瓶等，则常附有大量蛋白质和残存的细胞、碎片等，干后不易洗掉，故用后要完全浸入水中，避免留有气泡或浮在液面上。

02

刷 洗

浸泡后的玻璃器皿，一般要用软毛刷配合洗涤剂刷洗，以除去器皿表面附着较牢的杂质。工具不要太硬，刷洗要适度，过度会损害器皿表面光泽度，表面出现划痕后，会影响细胞贴壁生长，同时更容易破损。

03

浸 酸

酸液是由重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水按一定比例配制而成，酸液对玻璃器皿腐蚀作用轻微，但是长时间浸泡的细胞瓶会变脆，而其强氧化作用可除掉刷洗不掉的微量杂质。

浸酸是清洗过程中关键的一环。在接触酸液之前必须做好防护，准备过肘的耐酸手套、相关面部和身体的防护器具及工作服等。浸泡时要小心轻放，切忌直接将培养耗材直接丢入酸缸中，尤其是非全开放瓶口的器皿，在酸液流入瓶/管内会产生大量气泡，防止气泡产生破裂后，酸液小液滴迸溅，同时器皿要充满清洁液，勿留气泡或器皿露出清洁液面。浸泡时间一般为过夜，不应少于6 小时。  

Tips：酸液配置，可根据需要，配制成不同的强度，常用的下列三种： 

重铬酸钾（g）浓硫酸（ml） 蒸馏水（ml） 

（A）强酸液 63∶1000∶200000 

（B）次强酸液 120∶200∶1000 

（C）弱酸液 100∶100∶100

配制时应注意安全，酸缸容器应该选用耐强酸腐蚀等材质，且厚度要达标，配制酸液过程中，须穿戴耐酸手套和围裙，戴好防护镜、保护好面部及其他身体裸露部分。配制过程中可使重铬酸钾溶于水中，然后慢慢加浓硫酸。并不停的用玻璃棒搅拌，使产生的热量挥发，配好的新酸液一般为红棕的砖色，根据配制后的使用次数，酸液的氧化性和效果会逐渐减弱，且颜色逐渐变为墨绿色。

04

冲 洗

在浸酸后，将玻璃耗材捞出，尽可能沥干容器内的酸液，避免迸溅。先用自来水冲洗3-5次，然后用蒸馏水冲洗3-5次，ZH用去离子水冲洗3-5次，以保证器皿内无酸液残留，晾干或烘干备用。有条件的实验室可使用超纯水再次冲洗。

虽然器皿中残留的酸液很少，但是对冲洗后的废水处理，仍然要格外注意，如果量少可以存至废液桶统一处理，如果量大要根据实际情况判定，能否直接将废液排入下水道。

05

灭 菌

为了避免有水蒸气进入培养器皿中，一般选择干热方式灭菌。将已烘干的培养瓶/皿和移液管进行封口处理，使用双层锡纸等材料包裹瓶口，移液管尾以脱脂棉填充后，过酒精灯快速灼烧。包装封口过程中，避免使用纱布等易产生碎屑和纤维的材料，防止落入耗材中影响细胞培养，也避免使用胶带等不耐高温的材料，防止融化后不宜清理或导致起火。

待干热灭菌箱降到室温后，将处理好的培养耗材小心带至细胞房中照射紫外，进行表面消毒即可使用，记得在开封后使用无菌PBS进行润洗。

听完上述清洗步骤，师弟就要拔腿开溜，师兄悲泣地说：“没用的，就算你跑到天涯海角，不刷瓶也没法做实验，谁让我们实验室没有阿姨呢，楼下实验室阿姨连移液器吸头都给他们装好了~”并留下两滴贫穷的柠檬泪。

师兄我不跑，我给你看个塑料耗材的传单…”

“打住，塑料耗材质量不稳定还那么贵，小心老板觉得你想偷懒。”

“哪有？AlphaCell 细胞培养耗材，多种规格可选，伽玛射线消毒灭菌 ，无DNase、RNase、无热原无内毒素，亲水表面处理。最主要是质量有保证，价格公道合理，换算下来也没有贵很多，而且还安全，又硫酸又重铬酸钾的，这酸液溅到脸上，我不是破了相了吗？”

“行吧，你给我找一件被酸烧破洞的实验服，我一会去找老板谈一下，那这周的怎么办？细胞房里弹尽粮绝了。”

“我昨天问了，现货供应，我们下周找时间再处理这些吧，我先去做实验啦！”

想摆脱刷瓶的繁重劳动？想获得身体及心灵的自由？AlphaCell 细胞培养耗材值得拥有！不刷瓶，现货供应，随时开展实验！

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