全自动定量Western Blot:PROTAC药物研发巨头的共同选择

--蛋白裂解靶向嵌合体（PROTAC)--

蛋白裂解靶向嵌合体(Proteolysis targeting chimeras,PROTAC)是一种新兴的药物分子设计形式，靶结合配体与E3连接酶结合配体通过linker进行共价连接。这样一个双重功能的分子，一端可以结合目标蛋白，另一端结合E3连接酶，将两者形成靶蛋白-PROTAC-连接酶三元复合物，通过E3进行泛素化，从而使目标蛋白降解。

--全自动定量Western Blot 定量蛋白降解水平--

为了表征降解蛋白的水平，研究人员通常使用传统的SDS-PAGE Western印迹方法绘制量效曲线。但是冗长的手动操作以及由此导致的结果重现性差，使传统的SDS-PAGEWestern成为测定DC50值不可靠。

全自动定量Western Blot，可以3小时内完成定量Western Blot，覆盖2kDa-440Da的靶蛋白。快速定量，高重现性，微量样本等特点，使用使Simple Western系列成为PROTAC研究靶蛋白降解的量效关系的理想解决方案。

@辉瑞制药：靶向BTK的PROTACs

BTK是非受体蛋白酪氨酸激酶Tec家族的成员，是B细胞抗原受体（BCR）信号通路中的关键激酶，能够调节正常B细胞的增殖、分化与凋亡。BTK信号的异常调节与许多B细胞恶性肿瘤有关，是ZL血液肿瘤的理想靶点。

辉瑞研究与发展部内科医学研究室的科学家，筛选了11种化合物的PROTAC文库。使用全自动定量Western Blot检测靶蛋白BTK降解的量效关系和时效关系。

参考文献：Delineating the role of cooperativity in the design of potent PROTACs for BTK. Proc Natl Acad Sci U S A. 2018 Jul 31;115(31):E7285-E7292.

@葛兰素史克：靶向CDK4/CDK6的PROTACs

细胞周期控制是癌症的一个标志性特征，CDK4/6在许多癌症中过度活跃，导致细胞增殖失控。CDK4/6是细胞周期的关键调节因子，能够触发细胞周期从生长期（G1期）向DNA复制期（S1期）转变。在雌激素受体阳性（ER+）乳腺癌中，CDK4/6的过度活跃非常频繁，而CDK4/6是ER信号的关键下游靶标。因此，CDK4和CDK6YZ剂已成为FDA批准的针对乳腺癌患者的重要ZL选择。

英国葛兰素史克（GlaxoSmithKline）药物研究ZX的科学家，利用全自动定量Western Blot检测了给予PROTACs4–12（不同E3 ligase binder和linker的PROTACs）后，降解靶蛋白CDK4和CDK6的量效关系。验证了基于Palbociclib的PROTACs对于CDK4和CDK6降解具有选择性。

参考文献：Selective CDK6 degradation mediated by cereblon, VHL, and novel IAPrecruiting PROTACs, Bioorg Med Chem Lett. 2020 May 1;30(9):127106.

@葛兰素史克：靶向RIPK2的PROTACs

英国葛兰素史克（GlaxoSmithKline）药物研究ZX，利用全自动定量Western Blot检测不同的E3 ligase binder的PROTACs对靶蛋白RIPK2的降解水平，从而筛选合适的PROTACs候选物。

参考文献：Extendedpharmacodynamic responses observed upon PROTAC-mediated degradation of RIPK2, CommunBiol. 2020 Mar 20;3(1):140.

@英国Dundee大学：靶向BDR9的PROTACs的DC50和半衰期

BDR9属于BRD家族（含Bromodomain结构域）的第四个亚型，是哺乳动物SWI/SNF染色质重塑复合物的重要组成部分。人类肿瘤中SWI/SNF亚基突变的高发病率及几种癌症中BRD9的过表达，表明BRD9是症药物的潜在靶标，因此BRD9YZ剂可以作为新型抗肿瘤药物的候选药物。

英国Dundee大学生命科学学院生物化学与药物发现系的科学家，利用全自动定量Western Blot，检测靶向降解BRD9的PROTACs-26药物的DC50和半衰期。

参考文献：IterativeDesign and Optimization of Initially Inactive Proteolysis Targeting Chimeras (PROTACs) Identify VZ185 as a Potent, Fast, and Selectivevon Hippel−Lindau (VHL) Based Dual Degrader Probe of BRD9 and BRD7, J Med Chem. 2019Jan 24;62(2):699-726.

@英国Dundee大学：靶向SMARCA2/4的PROTACs量效曲线

BAF/PBAF染色质重塑复合物在约20％的人类癌症中发生突变，BAF/PBAF复合物包含两种ATPase：SMARCA2/4。因此靶向SMARCA2/4，是癌症ZL药物开发的重要方向。英国Dundee大学生命科学学院生物化学与药物发现系的科学家，利用全自动定量Western Blot，检测靶向SMARCA2/4蛋白降解的量效关系。

参考文献：BAF complex vulnerabilities in cancer demonstrated via structure-based PROTAC design. Nat Chem Biol. 2019 Jul;15(7):672-680.

参考文献：

Targeted protein degradation by PROTACs, Pharmacol Ther. 2017 Jun;174:138-144.

（来源：ProteinSimple）