一、产品应用
ND-2000是目前国内外实验室中使用1为广泛的一款微量分光光度计,其优越的性能、准确的结果赢得了广大用户的好评。
该产品可用于以下几个方面:
* 紫外检测:常规紫外光波长下检测样品吸光值;
* 核酸检测:可检测dsDNA、ssDNA、RNA等不同类型核酸的浓度及其在260nm、280nm处的吸光值;
* 探针检测:检测荧光标记探针的吸光值,可用于去除未能标记探针的样品;
* 细胞培养物检测:检测细胞培养物在600nm处的吸光值;
* 蛋白检测:检测普通纯化后蛋白的浓度和280nm处的吸光值;
* 蛋白标记检测:可检测被BCA、Bradford或Lowry标定的蛋白样品,自动画出标准曲线并计算出待测蛋白质浓度。
二、 产品简介
NanoDrop 2000超微量分光光度计是NanoDrop的1新产品,应用液体的表面张力特性,样品体积只需要 0.5~2ul,在检测台上,经上下臂的接触拉出固定的光径达到快速、微量、高浓度、免石英管、免毛细管等耗材检测吸收值的优点。此产品设计受保护,并在全1广受欢迎,其准确度与便利性让1家得以更进行各项研究。
NanoDrop 2000使用高能量氙灯(pulsed xenon flash lamp)可提供190~840nm的全光谱检测,且不需要暖机,开机后立即使用。搭配高感度CCD array检测器,检测吸收值可高达300Abs(dsDNA浓度2~15000ng/ul),大部分纯化后的核酸几乎都不需要稀释即可检测。
待测样品的均质性是NanoDrop 2000的1高要求,一般核酸、蛋白质样品能在检测前以vortex mixer震匀为1佳,若无vortex mixer也应以pipette吸放数次混匀。若担心genomic DNA可能因前述动作而断裂,则改以55゚C加热约一分钟,使样品在侦测前呈现均匀状态,以确保 2ul 具有代表性。
检测时选择不同检测模式,可以得到1快速的结果:
● Nucleic Acid – 吸收光谱、230nm, 260nm, 280nm吸收值(换算成10mm光径吸收值)、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸浓度。
● UV-Vis – 190~840nm间所有波长的吸收值及光谱(以1mm光径吸收值呈现)。
● A280蛋白质定量法 – 280nm吸收值(换算成10mm光径吸收值)、260/280 ratio及蛋白质浓度。仅适用于纯化后的蛋白质,须具有已知的质量消光系数(mass extinction coefficient)方可计算。
● BCA、Bradford及Lowry – 依不同呈色剂提供不同波长吸收值结果,自动画出标准曲线并计算R square,待测蛋白质浓度。
* 蛋白质检测模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三种常见定量呈色剂,因呈色剂随时间会逐渐加深,使用前请详阅试剂说明书并制备不同浓度的标准品,在1佳时间内完成检测,以得到良好的标准曲线。每个标准曲线1多可有七个标准品,每个标准品1多可做五重复。
* 测蛋白质时样品体积需使用 2ul,每个样品检测后需以Kimwipes 低尘擦拭纸(编号: 34155 )擦拭15~20回,以避免呈色剂与蛋白质的残留。观看影片。
浓度范围:
样品种类 | 1低浓度 | 1高浓度 (超过时请稀释样品) | 再现性 (五重复以上) |
核酸 | 2 ng/ul | 15000 ng/ul (dsDNA) 12000 ng/ul (RNA) | 浓度范围在 2-100 ng/ul 时,SD为 ± 2 ng/ul 浓度范围大于 100 ng/ul 时,CV为 ± 2% |
纯BSA | 0.10 mg/ml | 100 mg/ml | 浓度范围在 0.05-10 mg/ml 时,SD为 ± 0.10 mg/ml 浓度大于 10 mg/ml 时,CV为 ± 2% |
蛋白质,以BCA方式定量 | 0.2 mg/ml | 8.0 mg/ml | CV:± 2% (在可侦测的浓度范围内皆然) |
蛋白质,以modified Lowry方式定量 | 0.2 mg/ml | 4.0 mg/ml | CV:± 2% (在可侦测的浓度范围内皆然) |
蛋白质,以Bradford方式定量 | 100 ug/ml | 8000 ug/ml | 浓度范围在 100-500 ug/ml 时,SD为 ± 25 ug/ml 浓度大于 500 ug/ml 时,CV为 ± 5% |
蛋白质,以Mini Bradford方式定量 | 15 ug/ml | 100 ug/ml | 浓度范围在 15-50 ug/ml 时,SD为 ± 4 ug/ml 浓度大于 50 ug/ml 时,CV为 ± 5% |
三、技术参数:
1、波长范围: 190-840nm;
2、波长精度: 1nm;
3、分辨率:
4、其它: 1mm光程长度(可自动调整到0.05mm);
5、检测下限:2ng/μl(dsDNA);
6、检测上限:15000ng/μl(dsDNA);
7、吸光率度:0.002 absorbance (1mm光程);
8、吸光率准确性:2%(at 0.76 at 257 nm);
9、吸光率范围:0.02-300 (相当于10mm光程);
10、核酸检测周期:
11、体积:14cm×20cm。
四、使用方法举例:
dsDNA:在主画面点选Nucleic Acid,计算机与仪器自动完成联机。依照DNA所溶于之液体准备该溶液(务必确认DNA溶于二次水、TE buffer或哪一组kit的elution buffer)取出1.5 ul 点在侦测台上,放下上臂后再按Blank。在右上方拉选Sample Type 选 DNA-50,在Sample ID位置输入样品名称,将样品混匀,取出1.5 ul 点在侦测台上,放下上臂后再按Measure。
五、结果整理:
NanoDrop2000 软件在侦测一开始会询问档案欲存至何处,若未,则档案会存在上一个使用者的档案内。
六、注意事项:
1. 侦测后立即使用拭镜纸(Kimwipe类)擦拭台面。先取一张将上下台面的液体吸走,再将此laboratory wipe吸过样品的面反折到内部,折迭四次后以单方向多次擦拭台面(DNA 擦 5次,Protein 擦 20次)。
2. 同一滴液体只能做一次侦测,欲重复定量同一样品,请擦掉前一滴,重新取出一滴进行侦测。
3. 基本上核酸样品可使用1~2ul做测量,随各液体体积特性之不同会有不同体积需求,原则上不超过 2ul。并请使用2ul pipette避免体积不足导致液柱无法完整形成。唯蛋白质样品因呈色剂与蛋白质本身特性,务必使用2ul进行侦测。
4. 当软件跳出错误讯息时,请详细阅读并依指示进行障碍排除。1常发生的情形是在侦测过程液柱并未正确形成,软件会出现以下讯息。可先用肉眼观察液柱是否未完整连接上下台面,或样品内有泡泡,将上臂拉起后,擦掉该滴样品,再重新进行侦测,必要时可将样品体积加大至2ul。
5. 不可使用含有Hydrofluoric Acid (HF)之腐蚀样品,其它无腐蚀性之液体皆可使用。
七、日常与定期维护:
* 平时保持台面及仪器本身清洁。
* 定期校正。
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