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什么是酶联免疫吸附测定？

酶联免疫吸附测定，简称ELISA，是将抗原和抗体的特异性免疫反应与酶的催化反应相结合而建立的一种免疫检测技术。

ELISA可用于测定抗原或抗体，主要类型有：双抗夹心法、间接法、竞争法、捕获法、亲和素-生物素法。

双抗夹心法

双抗夹心法常用于检测抗原，其原理如下

1.抗体结合到固相载体表面，形成固相抗体；

2.待测抗原和固相抗体结合固定在固相载体上；

3.酶标抗体与固定在固相载体上的待测抗原结合 形成复合物；

4.酶量和样本中待测抗原正相关，加入底物，酶催化底物生成有色产物；

根据颜色反应的程度进行抗原的定性或定量分析。

间接法

间接法常用于检测抗体，其原理如下

1.抗原结合到固相载体，形成固相抗原；

2.待测抗体与固相抗原特异结合固定在固相载体上；

3.酶标抗体与固定在固相载体上的待测抗体结合形成复合物；

4.加入底物，酶和底物进行显色反应，根据颜色反应的程度进行抗原的定性或定量分析。

竞争法测抗体

当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用竞争法检测特异性抗体。

小分子抗原或半抗原缺乏可作夹心法的两个以上位点，因此不能用双抗夹心法，也可采用竞争法模式。

竞争法检测抗体，其原理如下

将抗原包被于微孔板中形成固相抗原，加入待测抗体和酶标抗体进行竞争结合，经合适的温度和一定时间的孵育，洗涤后，加入底物进行显色反应，微孔板中颜色的深浅与待测物的浓度呈负相关。

生物素-亲和素-Elisa法

生物素-亲和素法也是通过酶和底物颜色反应来检测抗原或抗体，和前面方法不同之处在于，酶不是标记在抗原或抗体上而是标记在生物素上，一分子亲和素可以与四个生物素小分子发生专一亲和作用，由于亲和素能和多个生物素结合，一个抗原抗体复合物上能标记多个酶，可以起到信号多级放大作用，当待测样本中抗原抗体含量低的情况下可以用该方法进行检测。

酶联免疫吸附测定实验所需仪器

ELISA实验中，标记在抗体或抗原上的酶与底物发生显色反应产生有色物质，不同显色反应其检测波长不同，对于ELISA实验其测定波长在300-700范围之内。

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文案：石桥新斋

图片：石桥新斋

校对：水果刀

排版：盛夏