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蛋白纯化一步就搞定的黑科技

发布:默克生命科学
浏览次数:2030

耗时长,产量低,

大家其实都一样

 

蛋白从克隆表达到纯化脱盐浓缩,一路经过千山万水,宝贵的活性蛋白产量是很多人的“命根子”。然鹅,努力的我们还是苦恼的时候多,欣喜的时候太少太少~~

 

纯化黑科技,是时候放大招了

 

有没有什么好方法能让操作步骤少一点、再少一点,而同时蛋白的活性及产量损失也少一点、再少一点??

 

让我们看看那些蛋白操作高手的秘密武器吧

——Amicon® Pro

由传统方法升级到革命性的Amicon® Pro纯化超滤系统,纯化、浓缩、换液从此不同。

 

真的能这样操作??

 

让我们一起来欣赏一下Amicon® Pro带来的蛋白纯化浓缩的流畅操作。

 

操作1

亲和纯化——多样本操作,更快更好

6次低速离心,总耗时~100分钟(含65分钟孵育时间)

1. 在Amicon® Pro上样池中加入200µL亲和纯化树脂(根据融合标签选择,50%悬浊液)和1.5mL漂洗缓冲液。1,000×g离心1min。

2. 加入0.5mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1h,其间可温和搅动促进结合。

3. 1,000×g离心1min 以去除未结合杂质。

4. 加入1.5mL漂洗缓冲液,1,000×g离心1min。

5. 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5mL超滤管(有5种截留分子量规格可选)。

6. 加入1mL洗脱缓冲液与树脂混匀。孵育5min。

7. 4,000×g离心15min。

8. 加上蛋白样品Z终需要的缓冲液1.5mL。4,000×g离心15min,置换缓冲液的同时进行浓缩。

9. 倒转Amicon® Ultra 0.5mL超滤管,1,000×g离心回收纯化和浓缩好的蛋白。

 

操作2

脱盐/缓冲液置换并浓缩——

20倍体积温和换液,效率大大提升

5次低速离心,总耗时~35分钟

1. 在上样池中加入0.5mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1min。

2. 优化选做:加入1.5mL用于置换的缓冲液,1,000×g离心1min。

3. 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5mL超滤管(有5种截留分子量规格可选)。

4. 加入1.5mL样品,4,000×g离心15min进行浓缩。

5. 加入1.5mL需要置换的缓冲液,4,000×g离心15min,换液的同时进行浓缩。

6. 倒转Amicon® Ultra 0.5mL超滤管,1,000×g离心回收处理好的蛋白。

 

操作3 

抗体标记——

操作步骤少、时间节省而抗体得率高

5次低速离心,总耗时~50分钟

1. 在上样池中加入0.5mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1min。

2. 加入抗体样品

• 对于比较稀释的样品(< 1mg/mL)

- 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5mL超滤管(建议使用50kDa)。

- 加上至多1mL抗体样品, 4,000×g离心15min。

• 对于浓度较高的的样品( 1mg/mL)

- 在Amicon® Ultra 0.5mL超滤管(建议使用50kDa)中加入至多100µL样品。

- 将装有样品的Amicon® Ultra 0.5mL超滤管接在Amicon® Pro上样池的下端。

3. Amicon® Pro上样池内加入预先准备好的1.5mL含有染料的反应混合液。

4. 4,000×g离心15min。

5. 优化选做:将样品在室温下多孵育30 min。

6. 上样池中加入1.5mL PBS± NaN3。

7. 4,000×g离心15min换液同时浓缩。

8. 倒转Amicon® Ultra 0.5mL超滤管1,000×g离心回收标记好的抗体。

 

更多关于Amicon® Pro的灵活应用正在各个实验室里被大家创造出来~~

欢迎告诉我们Amicon® Pro是如何帮助您提高蛋白操作效率的……

 

已经心动?


Amicon® Pro 24个/盒

(不含超滤管)

目录号ACS500024

 

可自行搭配Amicon® Ultra-0.5mL超滤管

· 3Kda 目录号UFC500396 

· 10Kda 目录号UFC501096 30Kda 目

· 录号UFC503096 

· 50Kda 目录号UFC505096 

· 100Kda 目录号UFC510096

 

 

点击以下链接,了解更多默克生命科学Millipore®常用超滤系列工具。

https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/acs500024?lang=zh®ion=CN&utm_medium=LLLWeChat&utm_source=WeChat&utm_campaign=China_LR1_Research_Amicon-Pro

标准超滤管

https://www.sigmaaldrich.com/china-mainland/zh/technical-documents/articles/biology/amicon-ultra-centrifugal-filters.html?utm_campaign=China_LR1_Research_Amicon-Pro&utm_medium=LLLWeChat&utm_source=WeChat

70mL超滤管

 

https://www.sigmaaldrich.com/catalog/search?term=microcon&interface=All&N=0&mode=match%20partialmax&lang=zh®ion=CN&focus=product&utm_campaign=China_LR1_Research_Amicon-Pro&utm_medium=LLLWeChat&utm_source=WeChat

平膜超滤管

 

https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/acs500024lang=en®ion=US&utm_campaign=China_LR1_Research_Amicon-Pro&utm_medium=LLLWeChat&utm_source=WeChat

纯化超滤管

 

https://www.sigmaaldrich.com/china-mainland/zh/technical-documents/articles/biology/amicon-stirred-cells.html?utm_campaign=China_LR1_Research_Amicon-Pro&utm_medium=LLLWeChat&utm_source=WeChat

搅拌式超滤杯

https://www.sigmaaldrich.com/china-mainland/zh/technical-documents/articles/biology/d-tube-dialyzers.html?utm_campaign=China_LR1_Research_Amicon-Pro&utm_medium=LLLWeChat&utm_source=WeChat

透析管

 

https://www.sigmaaldrich.com/catalog/search?term=multiscreen&interface=All_ZH&N=0&mode=match%20partialmax&lang=zh®ion=CN&focus=product&utm_campaign=China_LR1_Research_Amicon-Pro&utm_medium=LLLWeChat&utm_source=WeChat

高通量超滤膜板

 

https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/4104?lang=zh®ion=CN&utm_campaign=China_LR1_Research_Amicon-Pro&utm_medium=LLLWeChat&utm_source=WeChat

临床样品超滤管

 

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2020-06-03
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