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赛默飞世尔科技(中国)有限公司
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人生第一测,别让孩子输在“起跑线”上

发布:赛默飞世尔科技(中国)有限公司
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新生儿的健康

都说“十月怀胎,一朝分娩”,母亲是伟大的,每对父母都希望有一个健康的宝 宝。但是随着人类的发展和社会的进步,也带来了环境的污染,加之工作压力,生活不规律等众多因素影响,以及家族伴染色体遗传疾病等,使我们人类本该拥有的功能退化,比如不孕不育或是产生带有先天性代谢缺陷疾病的婴儿,新生儿的健康与否牵动着每个父母的心。

怎么办?

因此,在新生儿群体中,用快速、敏感的实验室方法对新生儿的遗传代谢病、先天性内分泌异常以及某些危害严重的遗传性疾病进行筛查,对那些患病的新生儿在临床症状尚未表现之前或表现轻微时通过筛查,得以早期诊断、早期治疗,防止机体组织器官发生不可逆的损伤。避免患儿发生智力低下、严重的疾病或死亡。

国外在早年间就已经对苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU) 筛查进行了研究,并将串联质谱技术(MS/MS)应用于新生儿筛查,我国于1994年10月颁布了《中华人民共和国母婴保健法》,以法律形式确定了新生儿疾病筛查在疾病预防发面的地位,卫生部于2010年11月制订了《新生儿疾病筛查技术规范(2010年版)》,对我国目前的两个主要筛查病种PKU及先天性甲状腺功能减低症(congenital hypothyroidism,CH)的筛查进行了进一步的规范指导,其新生儿筛查工作已在全国范围内得到普及。

赛默飞有办法

赛默飞一直致力于为全球各行各业提供有力的检测利器。针对新生儿筛查技术的不断发展,赛默飞开发了利用最新三重四极杆气质联用产品TSQ9000快速检测新生儿尿液中134种有机酸的分析方法,利用正构烷烃进行保留时间校正,操作方便快捷,灵敏度高,可为40种新生儿遗传代谢疾病的诊断提供有力的依据。

请看分解

01 样品制备

有机酸类一般不易气化,因此需对其进行衍生化处理(BSTFA+1%TMCS)以增强其气化程度。将已测定肌酐含量的尿液混合均匀,吸取相当于0.2mg肌酐的尿液,加到15mL离心管中,加入20μL脲酶(1 unit/μL),涡旋混合后置于37ºC恒温30min,加入事先计算体积的内标溶液(MGA和C24:0.5mg/mL,TA:1.0mg/mL)和蒸馏水,使总液量达到2mL,涡旋混合,然后加入500μL5%盐酸羟铵和400μL 2.5N氢氧化钠溶液,混匀,室温静置60min氧化,加入350μL6N盐酸溶液,混匀。(此时,样品处理可以暂停,放入4℃冰箱冷藏)用乙酸乙酯萃取两次,涡旋、离心,每次6mL,合并两次萃取液至于离心管中,加入5g无水硫酸钠,涡旋、离心,转移萃取液至新离心管中,氮吹至1mL左右,转移至1.5mL进样瓶中,氮吹至干,加入100μL BSTFA+1%TMCS 80ºC衍生化30min,之后转移至内插管中,进样测定。


02 检测难点及注意事项

#难点一:化合物较多,标液难买且不易互溶

解决办法:利用每种化合物的保留指数,通过正构烷烃的保留指数和保留时间计算出每种化合物的保留时间,无需购买标液,直接测定样品。

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基质加标(26种)色谱图

#难点二:无需标液,排除假阳性

解决办法:SIM/Full Scan同时采集数据

在检测结果中如果出现较大色谱峰时,可通过全扫数据进行NIST谱库检索,以确定该化合物。


#难点三:无需标液,如何定量

解决办法:利用半定量法进行定量

如下图所示,在样品中加入已知含量的内标十七烷酸(MGA),利用目标化合物与内标(MGA)峰面积比例计算出样品中有机酸的含量。建立了TraceFinder及变色龙两种工作软件方法,满足不同用户使用。

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注意事项:由于衍生化试剂遇水分解失效,所以要尽量除去样品中水分,吸取衍生化试剂时尽量减少其暴露在空气中的时间。以保证重复性。


03 实际样品测定

利用上述方法进行实际样品测定,上图为患有癫痫性脑病的4个月婴儿尿样,下图为正常2个月婴儿尿样。

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总结

本方法灵活快捷,操作简单,重现性好,能够为新生儿遗传代谢疾病的筛查与诊断提供初步的有力依据。

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2021-02-03
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