Vanquish Core带你探索生命之源

蛋白质作为生命的物质基础，可以说没有蛋白质就没有生命，而氨基酸作为蛋白质的基本单位，可以说是生命之源。

氨基酸分子为手性分子，有左旋和右旋两种光学异构体，被称为L型(左)和D型(右)两种。照常理讲，氨基酸化学反应需要L型氨基酸和D型氨基酸等量搭配作用。但存在于地球上所有的生物体中，氨基酸都为左旋型。这种被戏称为“左撇子地球”的偏差一直是一个谜题。

在古生物化石中，我们却能发现D型氨基酸的存在。这是由于生物死亡后埋在地下，有机体在自然条件下也被水解为氨基酸保存在化石中，但氨基酸的左旋体结构慢慢地会向右旋体结构转化，而各种左旋体结构的氨基酸都有自己的“半衰期”，考古学家就可以依据化石中氨基酸左旋体与右旋体的比例来确定化石的年代。

目前测定氨基酸通常使用氨基酸专用分析仪或液相色谱仪，而液相色谱法的广泛适用性具有其优势性，但常规液相检测氨基酸的分析中，需要进行衍生化处理，由于氨基酸衍生产物衰减较快，而离线手动衍生操作至进样分析的时间和操作强度很难保证均一，常常导致结果不稳定。

Vanquish Core

赛默飞全新的Vanquish Core 液相色谱仪，无需繁琐的离线手动衍生化操作，只需2ul以内的样品，利用邻苯二甲醛/ N-异丁酰基-L-半胱氨酸 (OPA/IBLC)在线柱前衍生化，生成非对映异构体衍生物（如图1所示），无需成本较高的手性柱，即可完成L型和D型氨基酸异构体的分离和测定。

图1 衍生化过程

仪器配置：

• 系统底座：Vanquish System Base (VC-S01-A)

• 泵：Vanquish Binary Pump C(VC-P10-A-01)

• 自动进样器：Vanquish Split Sampler CT(VC-A12-A-02)

• 柱温箱：Vanquish Column Compartment C(VC-C10-A-03)

• 检测器：Vanquish Fluorescence Detector(VC-D50-A-01)

色谱条件：

• 色谱柱：Accucore XL C18（150mm×4.6 mm，4 μm，P/N：74104-154630）

• 流动相：A：50mM乙酸钠水溶液（pH=6.0）；B：乙腈/甲醇/水=45:45:10，

流速：1.0 mL·min-1，梯度洗脱见表1

表1 梯度洗脱程序

• 进样量

混标：0.5ul ( 注：在线衍生试剂需0.25 ul)

样品：2.0ul ( 注：在线衍生试剂需2.2 ul)

• 柱    温：30℃

• 检测器：激发波长：230nm，发射波长：450nm，灵敏度：5，灯模式：标准

在线针内衍生程序

和常规进样方式相比，在线针内衍生方法需要使用Vanquish Core液相的用户自定义进样程序功能（User Defined Program,UDP），氨基酸在线针内衍生程序见图2。

图2 在线针内衍生程序

Position R:A2, 硼酸缓冲液；Position R:A3, 衍生试剂；

 Position R:A4, 稀释液（点击查看大图）

表2 衍生剂信息

色谱图：

实验结果与讨论 

本方法使用OPA/IBLC作为手性拆分衍生化试剂，利用全自动衍生功能的自动进样器进行在线衍生，衍生后直接进样分析，完成了手性异构体氨基酸的分离测定，消除了离线衍生进样时间不同和手工操作造成的误差，不仅提高了结果的准确性，而且大大降低了成本和工作强度。

不止于此

Vanquish Core 液相色谱仪不仅可用于生命的探索，对于测定我们目前生活密切相关的食品、药品以及化妆品中的氨基酸，Vanquish Core 液相色谱仪也不在话下。其可完全满足《SN/T 5223— 2019 蜂蜜中18 种游离氨基酸的测定gao效液相色谱- 荧光检测法》中在线自动衍生法测定氨基酸；而对于中草药中的氨基酸，胶原蛋白、肽类等化妆品中的氨基酸，Vanquish Core液相色谱仪也均可满足测定和研发的需求。另外，Vanquish Core液相色谱仪结合赛默飞du有的电雾式检测（CAD）无需衍生化处理，可直接完成氨基酸的测定，省时省力更经济。