送福利了 | 凝胶渗透色谱分析方法开发tips

凝胶渗透色谱法是体积排阻色谱法的一种，以水或者缓冲液为流动相；以有机溶剂为流动相的一般叫凝胶过滤色谱法。

两者都属于体积排阻色谱法（Size exclusion chromatography，SEC）。SEC是20世纪60年代发展的一种分离模式。它是根据空间结构不同的分子在多孔颗粒中的路径不同而进行分离。原理如下

原理

看完原理给我们就有了一个小的tips啦:

tips 1

分子直径比最 大孔隙直径大的分子全部被排阻在凝胶颗粒以外，两种或两种以上的这样的分子不能达到分离效果。

tips 2

分子直径比最小孔隙直径小的分子能全部进入凝胶颗粒内部，这样的两种或两种以上的分子也不能达到分离效果。

应用领域

生物药质控

•单抗
•双抗
•ADC
•融合蛋白
•血液制品
•重组白蛋白
•糖蛋白
•PEG蛋白
•多肽
•多糖
•纤维素

生物药工艺监控

•单抗
•双抗
•ADC
•融合蛋白
•血液制品
•重组白蛋白
•PEG蛋白
•多肽

辅料和残留分析

•吐温80/20
•聚乙二醇
•泊洛沙姆
•聚乙烯吡咯烷酮

食品化药领域

•水溶性抗生素聚体分析
•乳品中乳白蛋白和乳球蛋白分离
•中药中吐温20/80

不同的样品由于空间结构不同，在同一根柱子上的排阻范围不同。参考选用跟标准品结构最相近的排阻范围内的柱子。如下BIOBASIC系列SEC色谱柱的不同标准品的校准曲线如下：

方法开发考虑因素

1、孔径分布

相近孔径分布的柱子，在检测同一个样品时，聚体与主峰或者主峰与片段的分离可能会存在比较大的差异。

2、粒径

不同的粒径的相近孔径分布的柱子，分析需要的柱长和分析时间会有差异。

3、缓冲体系

缓冲体系中流动相的组成，pH值可能会改变蛋白的三维结构和折叠状态，进而影响单体，片段与聚体的分离。

4、盐浓度

由于包裹技术的差异，样品可能会跟色谱柱之间存在一些离子性吸附，这个时候，需要提高流动相中盐的浓度来屏蔽这种作用。Mabpac SEC 系列优异的包裹技术，可以在比较低的盐浓度下分析蛋白样品，进而用于Native 质谱方法开发。

仅仅给出方法开发tips怎么能表达我们的诚意呢，我们更推出了免费SEC做样的服务，快快扫描以下二维码报名参加吧：