RPLC-CAD 结合 HILIC-UV 在中药血塞通和血栓通注射剂指纹图谱分析中的应用

【概述】

基于整体表征的中药指纹图谱是国内外广泛接受的一种中药质量评价模式。中药的复杂性决定了单一分离模式无法满足中药化学成分表征的需求，多种分离模式组合将有利于强极性组分、同系物组分和微量组分的表征。本文基于反相色谱（RPLC） 结合亲水相互作用色谱（HILIC），采用紫外检测（UV）结合电喷雾检测(CAD)对血塞通和血栓通注射液的化学成分同时进行指纹图谱表征，采用 Vanquish Duo UHPLC 系统，快速有效对血塞通注射液进行了质量评价。

【实验/设备条件】

2.1.1 Vanquish Duo UHPLC 液相色谱仪ChromeleonTM Chromatography Data System ，变色龙色谱软件，版本7.2 SR9

2.1.2 Corona CAD VEO 电雾式检测器，

2.1.3 注射用血塞通：批号：16EB207；规格：200mg/ 支，注射用血栓通，批号为：16080310, 规格：150mg/ 支。

2.1.4 乙腈、甲醇 （色谱级，Fisher 公司），去离子水（18.2MΩ，Millipore 纯水机）， 甲酸（LC-MS，Fisher 公司）。

2.2 色谱条件

2.2.1RPLC-CAD 分析

色谱柱：Thermo acclaim polar advantage C16 `

（100×2.1 mm,2.2 μm）

柱温：25 ℃；

进样量：2 μL；

流动相: A 相为乙腈，B 为0.1%（V/V）甲酸，梯度洗脱

程序见表2。

CAD 参数：采集频率5Hz，Filter，3.6s，Evaporator Temp，50℃，PF=1.0

【样品提取】

样品溶液制备：取注射用血塞通和血栓通样品适量，精密称定，加70% 甲醇溶解并制成浓度为5 mg/mL的样品溶剂，直接进样分析。

【实验/操作方法】

皂苷类化合物是三七主要活性成分，围绕三七皂苷类成分化学、结构转化、生物转化、药理、质量评价等研究较多。由于三七皂苷中分子量相同的结构类似成分众多，单一分离模式无法全面表征三七的化学物质基础。RPLC 由于分离效能高，仍是分析人参皂苷的主流分离模式；亲水相互作用色谱HILIC，是分离分析极性化合物的重要手段。人参皂苷一般是由亲脂性的苷元基团和亲水性的糖链组成，因此RP 和HILIC 具有良好的正交选择性。本试验采用15 种人参皂苷对照品对两者的正交性进行了评价。

【实验结果/结论】

本文采用Vanquish Duo UHPLC 系统， 针对中药注射剂血塞通和血栓通，建立了基于反相色谱- 电雾式检测（RPLC-CAD）和亲水相互作用色谱- 紫外检测（HILIC-UV）的指纹图谱，并同时对样品中化学成分进行了表征分析。采用Vanquish Duo 的并联模式，在相同时间获得了RPLC 和HILIC 两维分离以及CAD 和UV 两种检测通道的数据，提高一倍分析效率的同时，获取了更多的化学物质组成信息。结果表明RPLC 和HILIC 对人参皂苷类化合物分离具有良好的正交性，结合两种不同分离模式，可以更加全面表征从常量到微量、痕量人参皂苷的细微差异，为保证产品质量和一致性奠定基础。