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凝胶成像系统成为了蛋白质研究中常用的工具之一

发布:上海培清科技有限公司
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在科学技术迅速发展的今天,凝胶电泳作为非常重要的科研实验方法早已被广泛应用于蛋白和核酸的分离。而电泳图像的采集、保存和相关处理分析主要依靠凝胶成像系统。凝胶成像系统中Western blot是一项在复杂样本中检测蛋白质表达水平的技术,至今已有超过40年的历史,并成为了蛋白质研究中常用的工具之一。

在凝胶成像系统中中蛋白质电泳凝胶如何拍摄?   

蛋白质凝胶电泳操作说明:   

1、把上述处理的样品按1:1(V/V)与2×SDS凝胶加样缓冲液混合,100℃加热3分钟,使蛋白质变性;   

2、取出变性蛋白质,立即放于冰上。样品如粘稠可进行超声对DNA进行剪切,以最 大功率处理0.5~2分钟应能有效地将裂解液粘稠度降至可控水平(注意:此步骤一定要在冰上进行);   

3、如有沉淀以10 000g将样本4℃离心10分钟,将上清液移至另一管中,弃去沉淀物;   

4、计算使用Western印迹法检测靶蛋白所需要的样本量,一般Western印迹法技术检测中等大小蛋白的检出下限约为1~5ng。在厚0.75mm的SDS聚丙烯酰胺凝胶上,每个泳道可加样100μg而不致过多;   

5、 用玻璃微量进样器按顺序加样,注意沿加样孔底上样,否则样品容易漂走。加样量不宜过多或过少,一般15~20ul为宜。没上样的加样孔中加1?SDS凝胶加样缓冲液;   

6、用注射器排除两玻璃板底部的气泡,将电泳装置接通电源(正极接下槽,负极接上槽),凝胶上所加电压为8v/cm,当溴酚蓝前沿进入分离胶后,电压可提高到15V/cm,继续电泳直至溴酚蓝到达分离胶底部(约4小时),关闭电源;   

7、从电泳装置上卸下玻璃板,放入一瓷盘中,用一注射器吸取若干毫升电泳缓冲液,将针头插入一玻璃板与凝胶之间,小心不要将凝胶刺破,沿玻璃板从左至右注入电泳缓冲液,将玻璃板与凝胶分开。靠近左边切去一角以标明凝胶的位置;   

8、如不需做免疫检测可直接用考马斯亮蓝染色。

2022-01-19
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